[发明专利]一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法

说明书

本发明公开了一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，涉及生物遗传学技术领域；为了能够建立在成虫体内即可看到明显迁移，且迁移效率高、稳定的肿瘤迁移；本方法具体包括将lgl^‑/‑UASRas^V12，FRT40A/Cyo；TM3/TM6B果蝇品系和Sp/Cyo；UASRas^V12，Sna^OE/TM3/MKRS果蝇品系进行杂交，在后代中选取基因型为lgl^‑/‑UASRas^V12，FRT40A/Cyo；UASRas^V12，Sna^OE/TM6B的果蝇，建成可传代保存的果蝇品系。本发明以果蝇结肠癌为模型，通过遗传操纵Ras和lgl，Sna等肿瘤相关因子的表达，建立了一种高效的肿瘤转移模型。

技术领域

本发明涉及生物遗传学技术领域，尤其涉及一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法。

背景技术

MARCM(Mosaic analysis with a repressible maker,抑制细胞标记镶嵌分析)是一项结合FLP/FRT和UAS/Gal4/Gal80两种体系的一项用于研究果蝇遗传发育的技术工具，利用MARCM技术能够使其中UAS/Gal4系统在嵌合体中增加目的基因表达，实现在特定组织表达我们感兴趣的基因(可将其突变)，用FLP/FRT系统在在正常染色体上的一条臂上插入Gal80，使正常细胞无法表现荧光，而突变染色体通过同源重组，删除Gal80后发生Gal4和UAS结合，表达目的基因，得到所需的嵌合细胞，通过荧光显微镜镜下观察GFP阳性细胞，达到正向标记的目的。

果蝇作为肿瘤学研究有效的模型之一渐渐被人们发掘。果蝇因其遗传资源丰富，肿瘤发生相关信号通路高度保守，而且人类约75％致病基因在果蝇体内均有同源物。果蝇近年来也成为了研究肿瘤发生发展的重要模型。目前果蝇体内肿瘤迁移模型较少，大多以幼虫期成虫盘模型，在幼虫阶段进行筛选，受限于幼虫期时间短(幼虫期共约5天)，肿瘤转移急性，给药难等问题，不能有效模拟病人肿瘤转移的动态特征以及研究与机体衰老的关系。已有的果蝇成体肿瘤转移模型以结肠癌居多，但是转移效率非常低，并不适合药物筛选和机制研究。因此迫切需要建立在成虫体内即可看到明显迁移，且迁移效率高、稳定的肿瘤迁移。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，包括如下步骤：

S1：将FRT40A/Cyo；TM3/TM6B果蝇品系和Sp/Cyo；Sna^OE/TM3/MKRS果蝇品系进行杂交，在后代中选取基因型为FRT40A/Cyo；Sna^OE/TM6B的果蝇，建成可传代保存的果蝇品系；

S2：在果蝇库中挑选基因型为：hsflp；FRT40A，tubGal80/Cyo；tubGal4，UASGFP/TM6B的处女蝇与S1中选取的基因型为FRT40A/Cyo；UASSna^OE/TM6B的雄性果蝇进行杂交，在后代中选取基因型为hsflp；FRT40A/FRT40A，tubGal80；UASSna^OE/tubGal4，UASGFP的雌性成虫作为正确基因型果蝇，其外观表型为平翅，肩毛数目正常；

S3：将羽化后2-3天的正确基因型果蝇在37℃水浴热激诱导1小时，后置于25℃恒温恒湿光照培养箱中培养3-7天，头部或胸部具有GFP的果蝇即为诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型。

优选的：所述S1中，FRT40A/Cyo；TM3/TM6B果蝇品系和Sp/Cyo；Sna^OE/TM3/MKRS果蝇品系进行杂交时亲本雌雄任意组合均可。