[发明专利]一种基于金盘电极的微型化电化学适配体检测平台的构建

权利要求书

1.一种基于金盘电极的微型化电化学适配体检测平台的构建，其特征在于，包括硅片基底和由工作电极、辅助电极、参比电极组成的三电极系统；

所述硅片基底表面镀有金膜，所述三电极系统集成在所述硅片基底上，所述工作电极为金盘电极，所述辅助电极为金片电极，所述参比电极为Ag/AgCl电极。

2.根据权利要求1所述的一种基于金盘电极的微型化电化学适配体检测平台的构建，其特征在于，所述硅片基底是边长为1 cm的正方形硅片基底，所述硅片基底设置有边长为0.4 cm的正方形电解池。

3.一种权利要求1-2任一项所述的基于金盘电极的微型化电化学适配体检测平台的构建，其特征在于，包括以下步骤：

将金原材料镀在硅片基底上；

将芯片的三电极依次用浓硝酸、无水乙醇和蒸馏水超声清洗，得到洁净的电极表面；

待电极表面干燥后，在作为参比电极的基底上涂覆Ag/AgCl浆料，自然晾干后，得到Ag/AgCl为参比电极、金盘电极为工作电极，金片电极为辅助电极的电化学传感器。

4.根据权利要求3所述的一种基于金盘电极的微型化电化学适配体检测平台的构建方法，其特征在于，所述超声清洗时间为5-8min/次，超声清洗1-3次。

5.一种权利要求1-2任一项所述的基于金盘电极的微型化电化学适配体检测平台的构建，其特征在于，包括以下步骤：

Apta在电极表面的自组装：将3.0 µL Apta溶液滴加到金盘电极表面，室温条件下避光自组装90分钟，取出后用TE缓冲液冲洗，记为Apta/Au微芯片电极；Apta与S.aureus的杂交：

将8.0 µL 含有S.aureus的溶液直接滴涂在Apta/Au微芯片电极表面，室温下杂交反应30分钟后用TE缓冲液冲洗，即完成分子杂交反应，得到S.aureus-Apta/Au微芯片电极；电化学检测：以K₃[Fe(CN)₆]溶液为指示剂，取8.0 µL溶液滴加到步骤（2）得到的微芯片电极的电解池内，通过循环伏安法（CV）的峰电流降低或交流阻抗（EIS）的阻抗值升高可以实现对金黄色葡萄球菌的定性检测。

6.根据权利要求5所述的一种基于芯片电极检测酶浓度的便携式掌上电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述Apta溶液浓度为5.0 mmol/L，采用的稀释液为TE缓冲液。

7.根据权利要求5所述的一种基于芯片电极检测酶浓度的便携式掌上电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述TE缓冲液配制方法为：取5 mL pH为8 浓度为1 mol/L的三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）和1 mL pH为8 浓度为0.5 mol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)，用去离子水定容到500 mL，125℃高温灭菌，室温保存备用。

8.根据权利要求5所述的一种基于芯片电极检测酶浓度的便携式掌上电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述S.aureus的培养步骤为：S.aureus菌种接种到灭活的亚碲酸盐肉汤培养基中，37 ℃恒温箱中培养6小时，从中取出1 mL菌液，重复上述操作，得到含菌样品。

9.根据权利要求5所述的一种基于芯片电极检测酶浓度的便携式掌上电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述循环伏安法采用的起始电位为0.6 V，终止电位为-0.2 V，电位增量为0.004 V，静止时间为2 s，采用的K₃[Fe(CN)₆]指示剂浓度为1.0 mmol/L。

10.根据权利要求5所述的一种基于芯片电极检测酶浓度的便携式掌上电化学传感器的检测方法，其特征在于，步骤（2）中所述交流阻抗法采用的低频率为0.1 Hz高频率为10000 Hz， 采用的K₃[Fe(CN)₆]指示剂浓度为5 mmol/L。