[发明专利]蚯蚓综合提取的方法

权利要求书

1.一种蚯蚓综合提取的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)浆化

将从冷库中取出的蚯蚓在室温下解冻，然后送入分离式磨浆机进行浆化处理，得到浆化液，浆化液的颗粒≤100μm；

(2)酶解

上述浆化液与纯净水以1:1的比例混合，得到蚯蚓混合液，将上述蚯蚓混合液送入酶解罐进行酶解，酶解是蚯蚓混合液在45℃—55℃下，依靠自身中所含酶的自溶特性进行溶解的过程，在酶解过程中，每隔30分钟搅拌一次，每次搅拌3分钟，酶解时间为3小时，得到酶解液，然后将所得到的酶解液送0—10℃的冷库中进行冷却，使得酶解液的温度降到15℃以下；

(3)三相分离

将上述酶解液送入蝶式离心机进行三相分离，从蝶式离心机的固渣出口排出的固渣和蚯蚓粪以1:1混合进行好氧发酵堆肥，经过1—3天堆温升至55℃-70℃，并保持时间4—7天，然后二次自然堆放20-40天后得到合格的有机肥；从蝶式离心机的油脂出口排出的油脂在75℃至85℃的温度下，经过油水分离器进行油水分离后，得到蚯蚓粗油脂，粗油脂的收率为蚯蚓重量比的2.1％，水分≤0.1％；从蝶式离心机的清液出口排出的离心液送入步骤(4)中；

(4)二相分离

上述离心液通过连接管道内的紫外线杀菌后，送入高速管式分离机进行分离，在高速管式分离机的转鼓壁上紧贴有聚四氟乙烯漆布，随着高速管式分离机的转鼓的高速旋转，离心液中比重较大的固体在离心力的作用下留到了聚四氟乙烯漆布上，比重较小的离心液从高速管式分离机的清液出口流出得到的清液，清液经由连接管道内的紫外线杀菌后，进入步骤(5)，离心完成后，抽出聚四氟乙烯漆布，清洗转鼓，用专用刮刀将聚四氟乙烯漆布上的固体刮掉后，送入第四真空干燥箱中进行真空干燥，干燥后的固体即为地龙蛋白；

(5)澄清

从步骤(4)中得到的清液送入澄清膜组件中进行澄清，澄清膜组件为120K中空纤维的内压管式膜组件，在一定的压力下，从中空纤维膜丝孔内透过丝壁到孔外的液体为澄清液，澄清液送入步骤(6)中，未透过超滤膜丝丝壁表面的液体从澄清膜组件的浓液出口流出，经过悬浮物检测仪检测溶液浓度后，再次返回澄清膜组件中进行澄清，当悬浮物检测仪检测到的溶液浓度达到55—65g/L时，从上述浓液出口流出的浓液返回到步骤(2)的酶解罐中；

(6)浓缩

从步骤(5)中得到的澄清液送入超滤浓缩膜组件中进行浓缩,超滤浓缩膜组件为5K中空纤维的内压管式膜组件，在一定的压力下，从中空纤维膜丝孔内透过丝壁到孔外的液体为清液，清液送入步骤(7)中，未透过上述丝壁的液体从超滤浓缩膜组件的浓液出口流出，经过悬浮物检测仪检测溶液浓度后，再次返回超滤浓缩膜组件中进行浓缩，当悬浮物检测仪检测到的溶液浓度达到45-55g/L时，从上述浓液出口流出的浓液送入步骤(8)中；浓液中的蚓激酶含量至少为562500u/ml，超氧化物歧化酶含量至少为27080u/ml；

(7)纳滤浓缩

从步骤(6)中得到的清液送入纳滤浓缩膜组件中进行浓缩，在一定的压力下，透过纳滤浓缩膜表面的液体为清液，该清液送入污水收集箱中进行污水处理，未透过纳滤浓缩膜表面的液体从纳滤浓缩膜组件的浓液出口流出，经过悬浮物监测仪检测溶液浓度后，再次返回纳滤浓缩膜组件中进行浓缩，当悬浮物监测仪检测到的溶液浓度达到45-55g/L时，从纳滤浓缩膜组件的浓液出口流出的浓液送入第一真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得到复合氨基酸；

(8)层析，它包括以下步骤：

(a)柱平衡

分别用体积为柱床体积的1.5倍的200mmoL/L的磷酸盐缓冲液，和体积为柱床体积的2倍的5mmol/L磷酸盐缓冲液对柱床进行平衡，先将柱床体积的1.5倍的200mmoL/L的磷酸盐缓冲液送入层析柱中，当液面高于柱床2—3cm时，打开层析柱底下阀门，当200mmoL/L的磷酸盐缓冲液全部进入层析柱后，关闭层析柱底下的阀门，磷酸盐缓冲液的流速是3.5L/min，让200mmoL/L的磷酸盐缓冲液在柱床中和离子交换剂静态交换平衡30分钟；打开关闭的层析柱底下的阀门，以同样的方式，将体积为柱床体积的2倍的5mmol/L磷酸盐缓冲液也送入层析柱中，当5mmoL/L的磷酸盐缓冲液全部进入层析柱后，关闭层析柱底下的阀门，让5mmoL/L的磷酸盐缓冲液在柱床中和离子交换剂静态交换平衡30分钟，柱平衡完成；

(b)上样和淋洗

将从步骤(6)浓液出口流出的浓液用食品级NaOH溶液将其pH调到7.8后，立即将其送入柱平衡完成的层析柱中，此过程称为上样，当液面高于柱床2—3cm时，打开层析柱底下阀门，继续上样，上样流速为2.5L/分钟，上样完成后，关闭层析柱底下的阀门，让柱床中的浓液和交换剂静态平衡交换30分钟，然后打开层析柱底下阀门，再用体积为柱床体积的1.5倍的5mmoL/L的磷酸盐缓冲液对上述层析柱进行淋洗，排出没有和交换剂进行交换的杂蛋白，关闭层析柱底下阀门；

(c)洗脱

洗脱是用体积为柱床体积的5倍的含有0.6mol/L的NaCl溶液，且该溶液是含有5mmol/L的磷酸盐缓冲液，将吸附在交换剂上的超氧化物歧化酶和蚓激酶洗脱下来，洗脱液的流速是3.5L/min，打开层析柱底下阀门将上述洗脱液分别进行收集处理，当出水管中流出的洗脱液为亮蓝绿色时开始收集，此时收集的液体为超氧化物歧化酶洗脱液，进入步骤(9)；之后，流出的液体变为棕褐色，此时收集的液体为蚓激酶洗脱液，进入步骤(10)，当液体变为橘黄色或淡黄色时洗脱结束；超氧化物歧化酶洗脱液中SOD含量至少为19500u/ml，蚓激酶洗脱液中的蚓激酶含量至少为120000u/ml；超氧化物歧化酶的收率为71％，蚓激酶的收率为80％；

(9)超氧化物歧化酶洗脱液的浓缩和脱盐

从步骤(8)得到的超氧化物歧化酶洗脱液送入第一浓缩脱盐膜组件的超滤浓缩管式膜中进行浓缩，超滤浓缩管式膜为5K中空纤维的内压管式膜组件，在一定的压力下，从内到外透过中空纤维膜膜丝表面的透过液为清液，清液送入污水收集箱中进行污水达标处理，未透过的洗脱液从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出，经过悬浮物监测仪检测溶液浓度后，再次返回超滤浓缩管式膜中进行浓缩，当悬浮物监测仪检测到的溶液浓度达到20—30g/L时，从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出的浓液送入清水混合器中，在清水混合器中加入与浓液相同体积的纯净水量，清水混合器的出口与超滤浓缩管式膜进口相连，溶液再次进入上述超滤浓缩管式膜进行循环浓缩，从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出的浓液在清水混合器中加入了4-6次纯净水后，并且当装在清水混合器进口的管道上的悬浮物监测仪检测到的溶液浓度达到20—30g/L时，从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出的浓液送入第二真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得到超氧化物歧化酶；

(10)蚓激酶洗脱液的浓缩和脱盐

从步骤(8)得到的蚓激酶洗脱液送入第二浓缩脱盐膜组件的超滤浓缩管式膜中进行浓缩，超滤浓缩管式膜为5K中空纤维的内压管式膜组件，在一定的压力下，从内到外透过中空纤维膜膜丝表面的洗脱液为清液，清液送入污水收集箱中进行污水达标处理，未透过的洗脱液从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出，经过悬浮物监测仪检测溶液浓度后，再次返回超滤浓缩管式膜中进行浓缩，当悬浮物监测仪检测到的溶液浓度达到45—55g/L时，从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出的浓液送入清水混合器中，在清水混合器中加入与浓液相同体积的纯净水量，清水混合器的出口与超滤浓缩管式膜进口相连，溶液再次进入上述超滤浓缩管式膜进行循环浓缩，从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出浓液在清水混合器中加入了4-6次水后，并且当装在清水混合器进口的管道上的悬浮物监测仪检测到的溶液浓度达到45—55g/L时，从超滤浓缩管式膜的浓液出口流出的浓液送入第三真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得到蚓激酶。