[发明专利]一种SNRPN父源缺失的检测引物组、试剂盒及非诊断目的的检测方法

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种SNRPN父源缺失的检测引物组、试剂盒及非诊断目的的检测方法。本方案通过设计了SNRPN位点检测的引物组，及该引物组制成的试剂盒，能够快速、准确且灵敏地检测出小胖威利综合征中SNRPN父源缺失（或功能缺陷），填补临床检测空白，从常染色体基因突变层面辅助找出造成小胖威利综合征的原因；实验结果重复性好，精密度高。最快能在90分钟内完成检测，节约检测时间，加快检测效率。检测仪器仅依赖普通PCR仪，临床推广性高。当父源性小胖威利综合征中SNRPN缺失（或功能缺陷）时，患儿即表现出小胖威利的表型，针对此突变的检测对于优生优育有着重大意义。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种SNRPN父源缺失的检测引物组、试剂盒及非诊断目的的检测方法。

背景技术

小胖威利综合征，正式医学名为普拉德-威利综合征（英文Prader-WilliSyndrome，简称PWS），因来自父亲的第15号染色体长臂（位置15q11-q13）基因突变导致的先天性终身性疾病，非孟德尔遗传的表观遗传性罕见疾病，是多系统化异常的复杂综合征。

小胖威利以肌张力低、生长发育迟缓、智能障碍、多食、肥胖及性腺功能减退为主要临床特征。因下视丘功能障碍，患者无饱腹感，长期的强烈饥饿感导致过度摄食造成威胁生命的肥胖。目前尚无办法根治，终身需在监管下生活。发病无种族和性别差异，国内发病率不明，预计中国5-10万患者，每年新增1500-4500例（按照国外发病率1/12000至1/15000估算）。

目前有关研究显示小胖威利综合征中存在SNRPN、NDN、MAGEL2、MKRN3和Cl5orf 2印记基因，它们仅存在于父源15号染色体的等位基因上。SNRPN位于印迹中心区域，可编码5种snoRNAs，被认为与小胖威利表型有密切关系，也是最可靠的诊断位点，可检出绝大多数小胖威利，并可用于产前诊断。正常人母源性小胖威利综合征中SNRPN的CpG岛高度甲基化，而父源SNRPN的CpG岛未甲基化，因此母源性基因失活，而父源性SNRPN基因有表达（遗传印记）。当父源性小胖威利综合征中SNRPN父源缺失（或功能缺陷）时，患儿即表现出小胖威利的表型。

小胖威利的致病原因及遗传机制非常特殊且复杂，绝大多数病例为新的突变，即父母亲皆正常，仅有极少数为遗传。大部分可归因于在卵子(精子)或胚胎形成阶段产生的基因错误，也就是在15号染色体长臂上有10多个基因被遗漏或抑制。

小胖威利的病因肇因于第15号染色体印迹基因区的基因缺陷，且此基因缺陷来自父亲，或同时拥有两条来自母亲的带有此缺陷的第15号染色体，若此基因缺陷来自母亲，则会造成Angelman syndrome(天使人综合征)。

目前小胖威利综合征的辅助诊断方法有：（1）高分辨率染色体分析（HRB）；（2）荧光原位杂交法（FISH）；（3）甲基化-特异性聚合酶链反应（MS-PCR）；（4）甲基化特异性多重连接依赖性探针扩增法（MS-MLPA）；（5）染色体微阵列分析（CMA）又称“分子核型分析”。此外，还可使用全外显子测序(父源缺失、突变)、微卫星标记、全基因组SNP微阵列芯片、Southern印迹杂交、DNA甲基化(MSP)、Affymetrix CytoScan芯片。《Parent-of-Origin Testing for15q11-q13 Gains by Quantitative DNA Methylation Analysis》公开的技术也是需要依赖荧光定量PCR仪器。这些检测方法要么依赖于特定的检测设备，如荧光定量PCR仪器、荧光显微镜、一代测序仪等；要么，具有操作复杂、技术要求高。