[发明专利]一种检测油菜转基因成分的引物对组合、试剂盒、检测方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测油菜转基因成分的引物对组合、试剂盒及检测方法。所述的检测油菜转基因成分的引物对组合包括用以扩增22种常用的检测转基因元件以及1种油菜内参基因序列HMGI/Y的引物对。本发明还涉及检测油菜转基因成分的试剂盒及检测方法。本发明技术方案操作简单，检测效率高；检验对象全面，具有较高的检测特异性、准确度和灵敏性；可用于转基因油菜及其制品的大规模检测，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测油菜转基因成分的引物对组合、试剂盒、检测方法及应用。背景技术

转基因油菜是全球四大转基因作物之一，其种植面积占全球转基因作物的5.3％。油菜在我过有很大的种植面积，是我国重要的由来作物。由于转基因油菜在我国还没有商业化种植，为了满足食用油和菜粕的用量，我国每年需要进口大量的油菜籽用作加工原料。然而大量的转基因产涌入市场，其环境及安全问题开始引起人们的重视，因此，开发高效、便捷的转基因食品检测技术显得至关重要。

转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。目前基于核酸的PCR检测方法仍是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、荧光定量PCR多重PCR等方法。相对于普通定性PCR方法，巢式PCR高了检测的灵敏度，容易造成假阳性。LAMP操作简单、特异性强，然而引物设计较为复杂，容易造成DNA污染，影响后续的实验。荧光定量PCR方法具有重复性好、灵敏度高、核酸交叉污染少的优点，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。普通的多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但一般不超过6重，否则引物之间干扰较大，影响检测效果。基因芯片和数字PCR技术也是常用的转基因产品检测技术，它们均具有高通量、灵敏度高、特异性强等优点，且可平行检测1个转基因作物中多个基因或同时检测多种转基因作物；然而其成本高昂，需要专门的仪器设备，要求操作人员具有较高的专业素质，这些因素限制了该技术在检测中的广泛应用。

因此研发一种高效、灵敏和通量高的转基因产品检测方法，成为亟待解决的关键问题。

发明内容

本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：

筛选常用的油菜转基因产品检测元件核苷酸序列即靶标分子及内参基因作为检测目标。包括22种检测常用的转基因元件：p35S、t35S、pNOS、pFMV35S、tNOS、tPINⅡ、pRBCS4、tE9、t7s、PAT、bar、NPtII、GOX、pTsf1、pTA29、Barnase、barstar、tOCS、tg7、AtRbcs-transit-peptide、cp4epsps和pAtUbiQuittin10，以及包括1油菜内参基因的序列HMGI/Y。

接着，本发明开发了用于检测所述的转基因元件和油菜内参基因的多重PCR引物组合物，其中22对针对22种转基因元件，2对针对两个内参基因。所述引物互相间不冲突，可以通过多重PCR进行高效的扩增。所述多重PCR引物组合物可以用于开发转基因元件检测试剂盒。

具体的技术方案为，第一方面，本申请提供了一种检测油菜转基因成分引物对组合，所述的引物对组合包括编号为BnGMO1、BnGMO2、BnGMO3、BnGMO4、BnGMO5、BnGMO6、BnGMO7、BnGMO8、BnGMO9、BnGMO10、BnGMO11、BnGMO12、BnGMO13、BnGMO14、BnGMO15、BnGMO16、BnGMO17、BnGMO18、BnGMO19、BnGMO20、BnGMO21、BnGMO22的22对引物，每对引物由正向引物和反向引物组成，具体的引物对组合核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.44所示。

还提供了包括用于扩增油菜内参基因HMGI/Y的编号为BnGMO23、BnGMO24两对引物对组合，每对引物由正向引物和反向引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.45-SEQ IDNO.48所示。