[发明专利]制备加载mRNA的脂质纳米颗粒的改进方法

权利要求书

1.一种将信使RNA(mRNA)包封在脂质纳米颗粒(LNP)中的方法，所述方法包括将(a)包含一种或多种mRNA的mRNA溶液与(b)包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质和一种或多种经PEG修饰的脂质的脂质溶液混合的步骤，以在LNP形成溶液中形成包封在LNP内的mRNA(mRNA-LNP)，其中所述mRNA溶液包含小于5mM的柠檬酸盐，并且其中所述mRNA-LNP的包封效率大于60％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液在混合前处于环境温度下。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述环境温度小于约35℃、小于约30℃、小于约26℃、小于约23℃、小于约21℃、小于约20℃或小于约18℃。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述环境温度的范围为约18℃-32℃、约21℃-26℃或约23℃-25℃。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含小于约4.0mM的柠檬酸盐、小于约3.0mM的柠檬酸盐、小于约2.5mM的柠檬酸盐、小于约2.0mM的柠檬酸盐、小于约1.5mM的柠檬酸盐、小于约1.25mM的柠檬酸盐、小于约1.0mM的柠檬酸盐或小于约0.5mM的柠檬酸盐。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含约3.0mM的柠檬酸盐。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含约2.5mM的柠檬酸盐。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含约2.0mM的柠檬酸盐。

9.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含约1.5mM的柠檬酸盐。

10.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含0mM的柠檬酸盐。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液进一步包含海藻糖。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法不需要在所述混合步骤前加热所述mRNA溶液和所述脂质溶液的步骤。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含每12L的所述mRNA溶液大于约1g的mRNA。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述mRNA溶液包含每8L的所述mRNA溶液约1g的mRNA。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述mRNA溶液包含每4L的所述mRNA溶液约1g的mRNA。

16.根据权利要求13所述的方法，其中所述mRNA溶液包含每2L的所述mRNA溶液约1g的mRNA。

17.根据权利要求13所述的方法，其中所述mRNA溶液中mRNA的浓度大于约0.125mg/mL、大于约0.25mg/mL、大于约0.5mg/mL或大于约1.0mg/mL。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述mRNA溶液与所述脂质溶液以在2:1与6:1之间的比率(v/v)混合。

19.根据权利要求18所述的方法，其中将所述mRNA溶液与所述脂质溶液以约4:1的比率(v/v)混合。