[发明专利]用于标记核酸的方法

权利要求书

1.一种用于标记包含N6-甲基腺嘌呤(N⁶mAde)的核酸的方法，所述方法包括：

i)在N⁶mAde的N6-甲基基团上形成α-氨基自由基；和

ii)用包含亚硝基吡啶基基团(O＝N-Py-)的自由基受体捕获所述α-氨基自由基。

2.根据权利要求1所述的方法，其中通过将包含N⁶mAde的所述核酸与以胺为中心的自由基阳离子接触以从N⁶mAde的所述N6-甲基基团提出氢原子来形成所述α-氨基自由基。

3.根据权利要求2所述的方法，包括氧化胺以产生所述以胺为中心的自由基阳离子。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述胺为叔胺，例如具有下式的奎宁环：

其中，R选自氢原子、羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6酰氧基、C_1-6反酯基或者基团-C(OH)R¹R²(其中R¹和R²选自C_1-6烷基)。

5.根据权利要求3或4中任一项所述的方法，其中将光催化剂用于氧化所述胺，任选地其中处于激发态或还原形式的所述光催化剂具有相对于SCE至少+1.10V至相对于SCE至多+1.45V的还原电势。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述光催化剂是过渡金属光催化剂，例如钌或铱光催化剂，任选地其中所述光催化剂选自[Ru(phen)₃]²⁺和[Ru(bpz)₃]²⁺。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述自由基受体是具有式(I)的探针：

O＝N-Py-L-X  (I)

其中-Py-是吡啶二基基团，-L-是接头且-X是标记。

8.根据权利要求7所述的方法，其中-L-是：

-L¹-L²-L³-

其中：

-L¹-选自共价键或者C_6-10亚芳基；

-L²-选自酰胺键、酯键、羰基键、胺键或者醚键；且

-L³-选自C_1-10亚烷基和C_1-10亚杂烷基。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中-X为点击反应配偶体(-C¹)，例如选自下列的基团：C_2-20炔基、C_2-20烯基、异氰基、叠氮基、硝酮、氧化腈和四嗪，优选地其中-C¹为C_2-20炔基，例如乙炔基。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中由具有式(II)的前体原位形成所述探针：

O₂N-Py-L-X  (II)

其中-Py-是吡啶二基基团，-L-是接头且-X是标记。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述前体选自式P1至P7的化合物：

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中通过还原所述式(II)的前体形成所述探针。

13.根据权利要求12所述的方法，其中将光催化剂用于还原所述式(II)的前体，例如其中将相同光催化剂用于还原所述式(II)的前体以及氧化胺以产生以胺为中心的自由基阳离子。