[发明专利]制备脂质体的方法

说明书

公开了无尺寸排除步骤的制备脂质体的方法及其组合物，该方法获得显示窄尺寸分布的小尺寸脂质体。该方法以lyso‑PS、PS和PC作为仅有的磷脂应用于脂质体形成。

相关申请的交叉引用

本申请要求在2020年7月1日提交的美国临时专利申请No.63/047,068的优先权，其公开内容通过引用并入本文。

关于联邦资助研究的声明

本发明是在国家卫生研究院授予的合同编号为HL070227的政府支持下完成的。政府享有本发明的一定的权利。

背景技术

脂质体是由脂质双层构成的封闭结构。该双层封闭了水相(内部水相)。目前制备脂质体的方法通常以乳化步骤开始，其中含有溶解在有机溶剂中的脂质的油相与水相混合并搅拌。然后该有机溶剂被蒸发，留下含有脂质体的水溶液。然而，通过这种流程制备的脂质体是尺寸不一的群体，并且通常较大(1微米及以上)。需要较小的脂质体时，为了减小尺寸，实施过滤或挤压步骤。然而，过滤和挤压会导致脂质损失，影响脂质体的装载效率。此外，挤压步骤在制造过程中带来了挑战，并且不容易实现规模化。

发明内容

本公开提供了用于制备脂质体组合物和方法，该方法无尺寸排除(sizeexclusion)步骤，但仍能产生与使用尺寸排除步骤的方法可比的具有窄尺寸分布的小尺寸脂质体。尺寸排除步骤的去除通过使用lyso-PS实现。避免尺寸排除步骤使得脂质损失减少，并有利于制造过程。

附图说明

图1显示了PS的暴露与脂质浓度的函数关系。

图2显示了由单独的PC、含有双链PS的PC和含有lyso-PS的PC组成的脂质体的示意图。

具体实施方式

本公开提供了制备脂质体组合物的方法，该脂质体组合物适于递送蛋白质/肽，从而实现免疫耐受的诱导。脂质体的制备方法使用了材料，因此在整个过程中不需要尺寸排除步骤，并且仍能够获得小尺寸、均匀分布的脂质体群体。在制备脂质体组合物的制造过程中，消除尺寸排除步骤是有利的。

在本申请中，单数形式的使用包含复数形式，反之亦然。例如，“一个(a)”或“一个(an)”也包括多个所指的条目，除非另有说明。

本说明书中给出的每个数值范围都包括其上限值和下限值，以及属于其范围内的每个较窄数值范围，如同这些较窄的数值范围都被在此明确写出。

“脂质结构”是指脂质体和其他结构，例如胶束结构、脂质体、cochleate、分子组装体等。

当本文中的术语“lyso”与磷脂结合使用时是指分子的甘油部分只有一个酰基链而不是两个酰基链。例如，lyso-PS只有一个酰基链，而PS有两个酰基链。

“脂质体”在本文中可被认为是脂质纳米粒子或纳米粒子。脂质体可以包括PC和PS，其中部分或所有PS是lyso-PS的形式。脂质体可以含有PS、lyso-PS和PC作为仅有的磷脂。脂质体可以含有lyso-PS和PC作为仅有的磷脂。PS或lyso-PS可以在双层的总磷脂的10％至30％的范围内，其余磷脂主要是PC或仅是PC。例如，lyso-PS可以占10至50％，或15至50％，或者15至30％，剩余的磷脂是PC。脂质体具有的PC：lyso-PS的比例可以是90∶10、80∶20、70∶30、60∶40或50∶50的摩尔比。只有PS(部分或全部)是lyso-PS的形式，而所有PC都有两个酰基链。在一个实施例中，磷脂酰乙醇胺(PE)可以被添加。可以以PC为代价添加PE，添加量最多为20摩尔％。

在各种示例中，脂质体不含任何PG。用于制备脂质体的磷脂可从任何可用来源获得，例如植物或动物。磷脂是市售的或可通过已知方法合成的。例如，PS可从猪脑PS或植物基大豆(例如大豆)PS获得。lyso-PS也是市售的。