[发明专利]志贺氏菌-四价（Shigella4V）生物缀合物

权利要求书

1.一种免疫原组合物，其包含来自福氏志贺氏菌2a(Sf2E)、福氏志贺氏菌3a(Sf3E)、福氏志贺氏菌6(Sf6E)和宋内志贺氏菌(SsE)的每一种的O-抗原多糖链；其中来自福氏志贺氏菌2a(Sf2E)、福氏志贺氏菌3a(Sf3E)、福氏志贺氏菌6(Sf6E)的所述O-抗原多糖分别共价连接至蛋白载体，所述蛋白载体已被修饰以包含N-糖基化共有序列。

2.根据权利要求1所述的免疫原组合物，其中所述N-糖基化共有序列是D/E-X-N-Z-S/T(SEQ ID NO:31)，其中X和Z可以是除了脯氨酸以外的任何氨基酸，并且任选地其中PgIB用于将所述多糖转移到所述N-糖基化共有序列D/E-X-N-Z-S/T(SEQ ID NO:31)，其中X和Z可以是除了脯氨酸以外的任何氨基酸。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的免疫原组合物，其中SsE共价连接至蛋白载体，所述蛋白载体包含能够被PgIL糖基化的O-糖基化共有序列，任选地其中PgIL用于将所述多糖转移到针对SsE的所述共有序列TWPKDNTSAGVASSPTDIK(SEQ ID NO:29)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的免疫原组合物，其中所述蛋白载体选自以下：霍乱毒素b亚单位(CTB)、破伤风类毒素(TT)、破伤风毒素C片段(TTc)、白喉类毒素(DT)、CRM197、铜绿假单胞菌外毒素A(EPA)、空肠弯曲杆菌吖啶黄抗性蛋白A(CjAcrA)、E.coli吖啶黄抗性蛋白A(EcAcrA)和铜绿假单胞菌PcrV(PcrV)。

5.根据权利要求4所述的免疫原组合物，其中所述蛋白载体是铜绿假单胞菌A(EPA)。

6.根据权利要求5所述的免疫原组合物，其中所述蛋白载体包含至少两个N-糖基化共有序列。

7.根据权利要求6所述的免疫原组合物，其中所述蛋白载体在一个(单糖基化)、两个(双糖基化)或所有三个N-糖基化位点(三糖基化)处糖基化。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的免疫原组合物，其中Sf2E、Sf3E和Sf6E的所述多糖通过所述O-抗原的还原末端共价连接至天冬酰胺残基的侧链氮原子。

9.根据权利要求8所述的免疫原组合物，其中所述天冬酰胺残基在所述D/E-X-N-Z-S/T(SEQ ID NO:31)N-糖基化共有序列。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的免疫原组合物，其中SsE的所述多糖通过所述O-抗原的所述还原末端共价连接；其中聚糖具有以下还原末端结构

(i)葡萄糖、半乳糖、呋喃半乳糖、鼠李糖、GlcNAc、GalNAc、FucNAc、DATDH、GATDH、HexNAc、脱氧HexNAc、diNAcBac或Pse的还原末端结构；

(ii)DATDH、GlcNAc、GalNAc、FucNAc、半乳糖或葡萄糖的还原末端结构；

(iii)GlcNAc、GalNAc、FucNAc或葡萄糖的还原末端结构；或者

(iv)半乳糖-β1,4-葡萄糖；葡萄糖醛酸-β1,4-葡萄糖；N-乙酰基-葡糖胺-α1,3-N-乙酰基-半乳糖胺；半乳糖-β1,4-葡萄糖；鼠李糖-β1,4-葡萄糖；呋喃半乳糖-β1,3-葡萄糖；N-乙酰基-阿楚糖醛酸-α1,3-4-氨基-N-乙酰基-葡糖胺；或鼠李糖-β1,4-N-乙酰基半乳糖胺的S-2至S-1还原末端结构。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的免疫原组合物，其中所述福氏志贺氏菌2a、福氏志贺氏菌3a、福氏志贺氏菌6抗原通过D-GlcNAc还原末端连接至所述N-糖基化共有位点中的一个的天冬酰胺残基的ε-氮原子。

12.一种革兰氏阴性宿主细胞，其不是宋内志贺氏菌，其包含来自宋内志贺氏菌(SsE)的所述O-抗原多糖。