[发明专利]用于冠状病毒中和抗体的检测测定法

权利要求书

1.测定样品中冠状病毒中和抗体的存在的方法，所述方法包括：

a)使所述样品与重组弹状病毒(rhabdovirus)颗粒接触，其中所述弹状病毒糖蛋白(G)被冠状病毒刺突(S)糖蛋白或其片段或衍生物取代，其中所述S糖蛋白、片段或衍生物能够介导第一靶细胞和第二靶细胞的感染；

b)在步骤(a)之后，使所述重组弹状病毒颗粒与表达报告蛋白的第一部分的第一靶细胞和表达所述报告蛋白的第二部分的第二靶细胞接触，以形成包含所述报告蛋白的第一和第二部分的合胞体，并产生可检测的报告信号，并且其中当与所述重组弹状病毒颗粒接触时，所述第一靶细胞和所述第二靶细胞能够彼此融合；

c)在步骤(b)后测量细胞中的报告信号，和

d)将步骤(c)中测量的报告信号与对照进行比较。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一靶细胞和/或所述第二靶细胞均包含血管紧张素转化酶2(ACE2)。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一靶细胞为Vero-DSP1(Vero-DSP-1-Puro；CLR-73)，所述第二靶细胞为Vero-DSP2(Vero-DSP-2-Puro；CLR-74)。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述报告蛋白的第一部分包含海肾(Renilla)荧光素酶或其突变体的氨基酸1-229，并且所述报告蛋白的第二部分包含海肾荧光素酶或其突变体的氨基酸230-311。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述报告蛋白的第一部分包含海肾荧光素酶或其突变体的氨基酸1-155，并且所述报告蛋白的第二部分包含海肾荧光素酶或其突变体的氨基酸156-311。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述报告蛋白的第一部分包含海肾荧光素酶突变体RLuc8的氨基酸1-155，并且所述报告蛋白的第二部分包含海肾荧光素酶突变体RLuc8的氨基酸156-311。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述报告蛋白的第一部分包含绿色荧光蛋白(GFP)或其突变体的氨基酸1-156，并且所述报告蛋白的第二部分包含GFP或其突变体的氨基酸157-231。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述报告蛋白的第一部分包含超折叠GFP的氨基酸1-213，并且所述报告蛋白的第二部分包含超折叠GFP的氨基酸214-230。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述报告蛋白的第一部分包含超折叠黄色荧光蛋白(YFP)的氨基酸1-154，所述报告蛋白的第二部分包含超折叠YFP的氨基酸155-262。

10.测定样品中冠状病毒中和抗体的存在的方法，所述方法包括：

a)使所述样品与重组弹状病毒颗粒接触，其中(i)所述弹状病毒糖蛋白(G)被冠状病毒刺突(S)糖蛋白或其片段或衍生物取代，其中所述S糖蛋白、片段或衍生物能够介导靶细胞的感染，并且其中(ii)所述弹状病毒颗粒包含报告蛋白和/或编码所述报告蛋白的核酸分子；

b)在步骤(a)之后，使所述重组弹状病毒颗粒与所述靶细胞接触；

c)在步骤(b)后测量所述细胞中的报告信号，和

d)将步骤(c)中测量的报告信号与对照进行比较。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述重组弹状病毒颗粒包含编码所述报告蛋白的核酸分子。

12.根据权利要求11所述的方法，其中将编码报告蛋白的核酸序列插入编码冠状病毒S糖蛋白或其片段或衍生物的核酸序列和编码弹状病毒大(L)蛋白的核酸序列之间。