[发明专利]能够在微藻类的叶绿体中产生胶原蛋白、弹性蛋白及其衍生物的肽、多肽或蛋白质的重组微藻类及其相关方法

权利要求书

1.一种重组微藻类，其包括编码包括氨基酸重复单元的重组蛋白质、多肽或肽的核酸序列，所述蛋白质、多肽或肽选自胶原蛋白、弹性蛋白和它们的衍生物，并且所述核酸序列位于微藻类的叶绿体基因组中。

2.一种在微藻类的叶绿体中产生包括氨基酸重复单元的重组蛋白质、多肽或肽的方法，所述蛋白质、多肽或肽选自胶原蛋白、弹性蛋白和它们的衍生物，其中所述方法包括用编码所述重组蛋白质、多肽或肽的核酸序列进行微藻类的叶绿体基因组的转化。

3.根据权利要求2所述的方法，其包括：

(i)提供编码所述重组蛋白质、多肽或肽的核酸序列；

(ii)将根据(i)的核酸序列引入能够表达所述核酸序列的表达载体中；和

(iii)通过表达载体转化微藻类宿主细胞的叶绿体基因组。

4.根据权利要求3所述的方法，其进一步包括：

(iv)鉴定转化的微藻类宿主细胞；

(v)表征用于产生由所述核酸序列表达的重组蛋白质、多肽或肽的微藻类宿主细胞；

(vi)提取重组蛋白质、多肽或肽；以及任选地

(vii)纯化所述重组蛋白质、多肽或肽。

5.根据权利要求3或4的任一项所述的方法，其中所述表达载体还包括至少一种表达盒，所述至少一种表达盒包括编码所述重组蛋白质、多肽或肽的核酸序列。

6.根据权利要求1所述的重组微藻类或根据权利要求2至5的任一项所述的方法，其中编码蛋白质、多肽或肽的核酸序列被密码子优化用微藻类宿主细胞的叶绿体基因组中的表达。

7.根据权利要求1或6所述的重组微藻类或根据权利要求2至6的任一项所述的方法，其中所述蛋白质、多肽或肽衍生物包括与重组肽、多肽或蛋白质的氨基酸序列至少80％同一性的氨基酸序列。

8.根据权利要求1或6-7的任一项所述的重组微藻类或根据权利要求3至7的任一项所述的方法，其中编码重组蛋白质、多肽或肽的所述核酸序列在其5’或3’端可操作地融合至编码载体的核酸序列。

9.根据权利要求1或6-8的任一项所述的重组微藻类或根据权利要求3至8的任一项所述的方法，其中编码重组蛋白质、多肽或肽的所述核酸序列可操作地连接至至少一种调节序列，其选自psbD启动子和5′UTR或与atpA 5′UTR融合的16S rRNA启动子(Prrn)启动子、，psaA启动子和5′UTR、atpA启动子和5′UTR和atpA和rbcL 3′UTR。

10.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其中所述至少一种表达盒进一步包括编码在其5’或3’端可操作地融合至编码重组蛋白质、多肽或肽的所述核酸序列的表位标签肽的核酸序列。

11.根据权利要求5至10中任一项所述的方法，其中所述至少一种表达盒进一步包括编码信号肽的核酸序列。

12.根据权利要求5至11中任一项所述的方法，其中所述至少一种表达盒进一步包括编码允许在特定细胞区室中产生所述重组蛋白质、多肽或肽的氨基酸序列的核酸序列。