[发明专利]用于提供具有针对肿瘤微环境细胞的嵌合抗原受体(CAR)的个性化细胞的方法

权利要求书

1.用于提供包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞的方法，所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的一种或多种靶抗原具有特异性，所述方法的特征在于提供包含肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞的细胞样品，并且重复以下的步骤：

-使细胞组织与包含荧光部分和抗原识别部分的缀合物接触，

-从细胞组织中去除未结合的缀合物，并且通过由第一缀合物的荧光部分发射的荧光辐射检测与缀合物结合的细胞，

-消除由缀合物的荧光部分发射的荧光，

直到鉴定了提供有识别不同抗原的抗原识别部分的至少两种缀合物，允许组合地区别肿瘤微环境细胞和非肿瘤微环境细胞，和

提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞选自T细胞、NK细胞、或被改造为在通过其它细胞的结合触发时破坏其它细胞的细胞。

3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于所述至少两种抗原识别部分作为与-、或-或非-型提供。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其特征在于所述至少两种抗原识别部分作为衔接子型提供。

5.根据权利要求4的方法，其特征在于通过提供包含生物素作为嵌合抗原受体(CAR)的抗原识别部分的细胞，并且提供所鉴定的至少两种抗原识别部分与抗生物素部分的缀合物，并且使所述缀合物与所述细胞缀合，来提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。

6.根据权利要求4的方法，其特征在于通过提供包含生物素作为第一嵌合抗原受体(CAR)的抗原识别部分以及第二表位作为第二嵌合抗原受体(CAR)的抗原识别部分的细胞，并且提供所鉴定的至少两种抗原识别部分与抗生物素部分和第二部分的缀合物，使所述缀合物与所述细胞缀合，来提供具有所鉴定的至少两种抗原识别部分作为嵌合抗原受体(CAR)的细胞。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其特征在于提供有抗原识别部分的所述至少两种缀合物结合至少20%的肿瘤微环境细胞和小于5%的非肿瘤微环境细胞。

8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其特征在于提供有抗原识别部分的所述至少两种缀合物结合的细胞样品的肿瘤微环境细胞是非肿瘤微环境细胞的至少10倍。

9.根据权利要求1至8中任一项的方法，其特征在于由所述荧光部分发射的荧光辐射通过所述缀合物的酶促降解得到消除。

10.根据权利要求1至9中任一项的方法，其特征在于对于暴露于肿瘤微环境细胞上的一种或多种靶抗原具有特异性的包含嵌合抗原受体(CAR)的细胞对于与所述肿瘤微环境细胞相关的肿瘤细胞是进一步特异性的。

11.根据权利要求1至10中任一项的方法，其特征在于包含嵌合抗原受体(CAR)的所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的选自α-SMA、CD74、CXCL12和PDGFRβ的一种或多种靶抗原是特异性的。

12.根据权利要求11的方法，其特征在于包含嵌合抗原受体(CAR)的所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞和肿瘤基质细胞上的选自α-SMA、CD74、CXCL12和PDGFRβ的一种或多种靶抗原是特异性的。

13.根据权利要求1至10中任一项的方法，其特征在于包含嵌合抗原受体(CAR)的所述细胞对于暴露于肿瘤微环境细胞上的选自CD47、CD51、CD58、CD90、CD206和CD239的一种或多种靶抗原是特异性的。