[发明专利]木霉属丝状菌突变株

说明书

公开了培养液的粘度降低的木霉属丝状菌的突变株的获得和使用该木霉属丝状菌的突变株的蛋白质的制造方法。β‑葡糖苷酶和β‑木糖苷酶的活性降低了木霉属丝状菌的突变株和培养该突变株来制造蛋白质。β‑葡糖苷酶和β‑木糖苷酶的活性降低了的木霉属丝状菌突变株与具有该酶的活性的亲本株相比能够将培养液的粘度保持得较低。

技术领域

本发明涉及能够将培养液的粘度保持得较低的木霉属丝状菌的突变株。

背景技术

已知木霉属丝状菌具有高的蛋白质制造能力，一直以来进行了使用木霉属丝状菌的蛋白质的制造的研究。木霉属丝状菌以纤维素、乳糖、纤维二糖等作为诱导物质，在蛋白质之中特别是制造被分类为糖化酶的纤维素酶。为了强化纤维素酶制造量，自古以来对于以控制纤维素酶制造的因子的过表达、缺损为代表的基因的改变、培养条件的最适化等进行了大量研究。

另一方面，木霉属丝状菌属于生长繁殖、蛋白质的制造需要氧的好氧性丝状菌。另外，木霉属丝状菌具有如果在液体培养基中培养，则随着增殖而培养液的粘度提高这样的特征。如果培养液的粘度提高，则氧、营养素的分布变得不均匀，因而在培养木霉属丝状菌时，需要通过增加搅拌数、增大通气量而将培养环境维持一定。如果培养槽大型化，则为了使培养环境一定需要庞大的搅拌动力，存在强的搅拌付与菌体以大的剪切损伤这样的课题。

专利文献1～6中分别公开了通过使粘性的木霉属丝状菌的Sfb3、Mpg1、Gas1、Seb1、Crz1和Tps1的蛋白质破坏或生成减少，从而与亲本株相比能够以更低的搅拌数维持培养环境。

另外，专利文献7中记载，如果破坏木霉属丝状菌的BXL1基因，则能够抑制培养液的溶解氧饱和度的降低。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本特表2013-533751号公报

专利文献2:日本特表2014-513529号公报

专利文献3:日本特表2014-513530号公报

专利文献4:日本特表2014-513531号公报

专利文献5:日本特表2014-513532号公报

专利文献6:日本特表2014-513533号公报

专利文献7:国际公开第2017/170917号

发明内容

发明要解决的课题

如上所述，使用木霉属丝状菌制造蛋白质时，抑制培养液中的溶解氧浓度的降低、将其保持在一定以上是非常重要的。本发明者们考虑，如果在使用木霉属丝状菌利用液体培养制造蛋白质时，能够将培养液的粘度保持得较低，则即使在将培养规模大型化的情况下，也能够降低搅拌所需的能量，并能够抑制培养液中的溶解氧饱和度的降低。本发明中，以获得培养液的粘度降低的木霉属丝状菌的突变株和提供使用该木霉属丝状菌的突变株的蛋白质的制造方法为课题。

用于解决课题的手段

本发明者对于能够将培养液的粘度保持得较低的木霉属丝状菌的筛选进行了深入研究，结果发现，β-葡糖苷酶和β-木糖苷酶的活性与突变导入前的亲本株相比降低了木霉属丝状菌的突变株，从而培养液的粘度被保持得较低，从而完成了本发明。

即，本发明以下(1)～(7)。

(1)木霉属丝状菌的突变株，其β-葡糖苷酶和β-木糖苷酶的活性与突变导入前的亲本株相比降低了。

(2)根据(1)所述的突变株，所述β-葡糖苷酶的比活性为0.02U/mg-蛋白质以下，并且所述β-木糖苷酶的比活性为0.002U/mg-蛋白质以下。