[发明专利]密封的细菌菌影及其组合物、方法和用途

说明书

本公开提供了密封的细菌菌影、产生密封的细菌菌影的方法和组合物，以及使用密封的细菌菌影来递送药物、治疗或预防疾病和其他医疗用途的方法和组合物。

技术领域

本发明涉及密封的细菌菌影、产生密封的细菌菌影的方法和组合物，以及使用密封的细菌菌影来递送药物、治疗或预防疾病和其他医疗用途的方法和组合物。

背景技术

细菌菌影(BG)是细菌的无生命空细胞被膜，通过细胞被膜中通道释放细菌细胞质而产生，这些通道是通过革兰氏阴性细菌^1,2中噬菌体phi X174裂解蛋白E的受控产生或通过基于革兰氏阳性细菌中化合物的临界浓度^3,4的方法生成的。

BG在细菌细胞表面仍然具有完整的抗原结构，它们可以直接用作疫苗^5-7。BG也是负载诸如抗原、药物和DNA^8-11等生物大分子的优良递送平台。更重要的是，BG含有众所周知的先天免疫刺激组分，因此作为佐剂的潜力巨大。引发免疫反应不仅取决于所述抗原的分子特性或宿主的免疫原性易感性，还取决于所述抗原的制剂。因此，大多数疫苗制剂含有免疫调节组分，广泛称为佐剂，以增强针对弱免疫原性抗原的免疫反应。佐剂主要通过刺激存在于宿主免疫系统细胞上的先天免疫受体来增强疫苗抗原的免疫原性¹²_,¹³。BG保留了诸如脂多糖(LPS)、鞭毛蛋白、肽聚糖以及在天然细菌被膜中发现的许多其他物质的组分的抗原性，这些组分是各种模式识别受体(PRR)的配体，并且统称为病原体相关分子模式(PAMP)^14,10,11。这些被膜结构被免疫细胞和非免疫细胞识别和吸收^15-17，将主要通过TLR2和TLR4途径刺激细胞^18,19，并且在许多免疫细胞和非免疫细胞上存在多个TLR构成了它们佐剂活性的基础。因此，BG不仅是一种优良的抗原递送系统，而且是治疗性或预防性疫苗的有效佐剂。此外，BG的颗粒性质使其成为吞噬抗原呈递细胞(如树突细胞和巨噬细胞)的理想体内靶向载体。

发明内容

本公开提供了密封的细菌菌影，以及用于产生密封的细菌菌影的方法和组合物，和密封的细菌菌影用于递送药物、引发或增强免疫反应、治疗或预防疾病等的方法、组合物和用途。具体地，本公开提供了革兰氏阳性细菌的密封的细菌菌影。本发明人惊奇地发现，革兰氏阳性细菌的细菌菌影可以被阳离子脂质体有效地密封。即使在密封后72小时内，负载到随后被阳离子脂质体密封的细菌菌影中的分子仍保留在所述细菌菌影中。相比之下，大多数负载到细菌菌影(负载后未密封)中的分子在负载后4小时从所述细菌菌影中泄漏出来。本发明人还发现了一种负载和/或密封细菌菌影有效且简单的方法，通过该方法可以高效且有效地负载和/或密封所使用至少99％的细菌。如目前的结果所示，密封的细菌菌影可以携带比未密封的细菌菌影更多的药物或生物分子，因此作为在体内递送药物或生物分子的平台或媒介物具有很大的优势。

附图说明

图1：非热等离子体射流放电系统的示意图。

供气系统1向气体调节系统2供气，所述气体调节系统2可以根据需要调节气体流速、不同气体的比例等参数，然后将所述气体引入射流形成装置4。3代表气体流动方向。所述供气系统1可以提供诸如N₂、He、H₂、Ar、O₂、空气、CO₂、CO等不同种类的气体。细菌悬浮液8可以直接添加到液体容器11中，也可以放置在另一个容器(8a)中，然后引入所述液体容器11中。处理过的细菌悬浮液可以直接收集，或者可以导入另一个容器(8b)中。电源系统9向两个电极施加高电压。功率调节系统10将电压、频率和电流组合调节到最佳间隔。所述电源系统9还包括反馈、显示和记录系统，用于反馈、显示和记录各种参数的变化。所述射流形成装置4包括在远端具有喷嘴的外壳(或管道)6、高压电极5和接地金属电极7。气体通过外壳或管道所包围的空腔。所述射流形成装置4的最远端4a可以位于所述细菌悬浮液的液面上方20mm到液面下方10mm的任何位置。