[发明专利]重组钙卫蛋白

说明书

本发明涉及一种多肽，该多肽包含与SEQ D NO：1具有至少80％序列同一性的氨基酸序列的第一链；包含与SEO D NO：2具有至少80％序列同一性的氨基酸序列的第二链：和连接第一链和第二链的接头。此外，本发明涉及使用这些多肽作为诊断方法中的校准物和标准物的方法。

技术领域

本发明涉及多肽，其包括包含与SEQ ID NO：1具有至少80％序列同一性的氨基酸序列的第一链；包含与SEQ ID NO：2具有至少80％序列同一性的氨基酸序列的第二链；以及连接第一和第二链的接头。此外，本发明涉及使用这些多肽作为诊断方法中的校准物和标准物的方法。

背景技术

钙卫蛋白(CP)是一种细胞质蛋白，表达于各种骨髓细胞类型，如中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞。在中性粒细胞中，钙卫蛋白是组成型表达的，可能构成总细胞质蛋白的约40％，而在上皮细胞和角质形成细胞中，可以诱导钙卫蛋白表达。

钙卫蛋白由两条多肽链Mrp8(同义词：S100A8，钙粒蛋白A)和Mrp14(同义词：S100A9，钙粒蛋白B)组成，形成稳定的二聚体。在大约150μM Ca²⁺的存在下，两个Mrp8/Mrp14异二聚体可以形成一个异四聚体，因其能够作为其他二价阳离子，如Zn²⁺的螯合复合物，可在营养免疫过程中饿死微生物，在营养免疫中具有重要作用(Zygiel EM,Nolan EM.宿主防御蛋白钙卫蛋白对过渡金属的螯合作用(Transition Metal Sequestration by theHost-Defense Protein Calprotectin)(2018).Annu.Rev.Biochem.87:621-43)。

由于其在炎症部位的释放，钙卫蛋白被认为是一种警报素，经常被用作监测炎症过程的生物标志物。例如，粪便钙卫蛋白目前是诊断和监测炎症性肠病(IBD)的金标准，例如克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)(Konikoff MR,Denson LA.粪便钙卫蛋白作为炎症性肠病肠道炎症生物标志物的作用(Role of Fecal Calprotectin as a Biomarker ofIntestinal Inflammation in Inflammatory Bowel Disease)(2006).Inflamm.BowelDis.12(6):524-34)。

此外，血清CP被验证为监测各种(慢性)炎症性疾病的生物标志物，例如类风湿性关节炎(Austermann J et al.风湿病中的S100蛋白(S100 proteins in rheumaticdiseases)(2018).Nat.Rev.Rheumatol.14:528～541；Ometto F et al.钙卫蛋白在风湿病中的作用(Calprotectin in rheumatic diseases)(2017).Exp.Biol.Med.242:859～873)。

为了开发可靠的免疫测定来测量钙卫蛋白，使用高度纯化的钙卫蛋白抗原非常重要，该抗原必须尽可能与天然钙卫蛋白相似。这避免了由校准品、对照品和样品之间的抗体反应性差异引起的测定问题。目前，钙卫蛋白主要作为粪便生物标志物用于在有机IBD和无机肠易激综合征之间进行区分，但没有普遍接受和/或验证的参考材料可用于校准血液或粪便分析测定。

方法比较表明，来自不同制造商的粪便钙卫蛋白测定之间存在明显的校准差异(De Sloovere MW et al.两种粪便钙卫蛋白自动免疫分析检测炎症性肠病的分析和诊断性能(Analytical and Diagnostic Performance of Two Automated FecalCalprotectin Immunoassays for Detection of Inflammatory Bowel Disease)(2017).Clin.Chem.Lab.Med.55(9):1435～1446),这严重加剧了医生对测试结果的解释。