[实用新型]循环肿瘤细胞苏木素-伊红染色装置以及苏木素-伊红染色和微量核酸提取、浓缩装置

说明书

本实用新型涉及医学病理检验和细胞分子生物学技术领域，具体公开了循环肿瘤细胞苏木素‑伊红染色装置以及苏木素‑伊红染色和微量核酸提取、浓缩装置。苏木素‑伊红HE染色装置包括：细胞小室，所述细胞小室上方开口，且底面为有机材料膜，用于截留循环肿瘤细胞并滤过染色试剂；滤膜，所述滤膜可操作地设置在所述细胞小室中，用于截留循环肿瘤细胞；细胞井，所述细胞井上方开口，用于收集所述细胞小室的滤过液；所述细胞小室可操作地悬挂于所述细胞井的内壁中。该装置还包括微量核酸提取试剂盒和微量核酸浓缩装置，微量核酸提取试剂盒包括用于盛放滤膜并进行核酸提取的微量核酸提取管，微量核酸浓缩装置包括用于支持微量核酸提取管的管座。

技术领域

本实用新型涉及医学病理检验和细胞分子生物学技术领域，具体涉及循环肿瘤细胞苏木素-伊红染色装置以及苏木素-伊红染色和微量核酸提取、浓缩装置。

背景技术

循环肿瘤细胞(Circulating tumor cell，CTC)是1896年TR Ashworth在对患癌病人尸体解剖时通过观察病人的血液发现的与体内相同肿瘤的血液肿瘤细胞。目前CTC检测仍存在病理专业对接断裂缝隙，CTC被普遍认为是必然进入医院肿瘤常规检诊的病理检验或实验中心科细胞苏木素-伊红染色(HE)形态诊断项目，应该由病理HE 常规技术代替非HE染色才能进行病理形态诊断，应由医学病理医师签发诊断报告。

虽然基因组技术近十年来的发展突飞猛进，但现有CTC生物产品技术在临床病理科常规诊断技术中的应用十分薄弱。病理HE染色诊断专业技术作为目前唯一的医学病理诊断的核心技术，是医学肿瘤诊断不可或缺的技术。然而，现有技术一般仍采用FISH荧光杂交和模糊的DAPI染色信号判断CTC的标志物阳性或阴性，例如：美国强生公司使用Cellsearch仪器用上皮细胞抗体荧光标记技术对循环中的乳腺癌上皮样肿瘤细胞进行染色；专利申请CN201710568652.9使用磁珠、 3-4种抗体、微流体吸附等组合设备，然后仍然是进行荧光原位杂交在荧光显微镜下观察。其他如叶酸标记技术、全自动微流体芯片(CytoChipNano)、密度梯度离心技术等，都是对CTC细胞进行荧光原位杂交染色，而且叶酸酶对时间性要求高，容易失活和降低杂交效率，只能获取不足30％的CTC癌细胞，不能全部捕获肿瘤细胞，因此存在假阴性问题。

荧光杂交标志物染色技术中，CTC的检测图像是在载玻片平面的 CTC细胞区域获取荧光原位杂交信号，必须在荧光显微镜暗视野观察点状荧光信号，而无法反映肿瘤细胞全面的核浆形态，因此，荧光杂交标志物染色技术无法满足病理学常规染色诊断技术的要求。此外，武汉某医疗科技股份有限公司使用负压条件下的膜过滤单一技术获取恶性肿瘤细胞，可以进行快速直接单一的亚甲蓝或吉姆萨或DAPI 染色，同时封片观察，但该方法仅能够观察血液细胞模糊蓝色细胞核影像，仅供检验科观察，不能用于病理科肿瘤细胞诊断的核浆染色。目前尚未有CTC病理HE形态诊断产品进入医院常规应用，这形成了生物和医学两领域间转化应用的现实平台裂缝，遏制了生物新技术在临床医学的应用推广。

另一方面，临床和病理检查亟需将CTC进行核酸提取和后续的基因测序和染色体及拷贝量变异检测。但是由于肿瘤患者血液往往仅能够提取到个位数的CTC，全部无损耗提取核酸也仅有100ng左右的微量核酸总量。而且，在市售核酸试剂盒常规提取流程中，通常需要不断地在每个步骤间转移试管，原本罕少的极低浓度核酸在多次更换试管管壁上的滞留，会导致核酸总量降低至检出阈值以下。这些都使得 CTC核酸提取的技术难度很大。已有文献报道CTC能提供的DNA量太少若不经浓缩则无法获得足够的DNA进行下游基因实验(Takeda K, Yamada T,Takahashi G,et al.Analysis of colorectal cancer-relatedmutations by liquid biopsy:Utility of circulating cell-free DNA andcirculating tumor cells[J].Cancer Science,2019.)。目前临床上只能实现 CTC的细胞学形态检测，尚未实现后续核酸提取和基因检测的稳定进行。