[发明专利]8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法

说明书

本发明提供了一种8‑羟基‑2‑脱氧鸟苷的检测方法。其中，该检测方法包括：S1，利用UPLC‑MS/MS联用建立8‑羟基‑2‑脱氧鸟苷的浓度和峰面积的标准曲线；S2，用提取液对待测样品进行前处理，获得待检测液；S3，采用UPLC‑MS/MS联用对待检测液进行检测，得到8‑羟基‑2‑脱氧鸟苷的离子谱峰；根据标准曲线和离子谱峰换算得到待测样品中的8‑羟基‑2‑脱氧鸟苷的含量；提取液包括75～85v/v％甲醇水溶液。解决了现有技术中的8‑羟基‑2‑脱氧鸟苷的检测中提取率低的问题，适用于生物检测领域。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体而言，涉及一种8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法。

背景技术

DNA的氧化损伤能被各种因素诱导，包括内源性细胞代谢产物、化学物、电离和非电离辐射等，其机制主要与活性氧自由基产生有关，不同生物体(例如植物、动物、微生物或人等)内均存在多种DNA修复途径清除损伤。通过分析DNA加合物或DNA氧化损伤修复产物等生物学标志物，可以对生物体内氧化负荷进行检测，其中8-羟基-2-脱氧鸟苷与DNA氧化损伤明显相关，成为研究最多的DNA碱基氧化损伤修复产物。

目前分离检测8-羟基-2-脱氧鸟苷的方法主要有高效液相色谱电化学法、标记薄层色谱法、免疫化学分析、荧光后标记、高效毛细管电泳法及气相色谱质谱法等。然而，上述方法都存在一定的缺陷，例如：气相色谱质谱法需先衍生化反应，衍生过程易产生副产物，导致假阳性结果。标记法的特异性有待提高，且易造成放射性污染。免疫化学法的专属性差，且发生交叉反应，导致检测值较真实值偏高。且现有技术中，对于8-羟基-2-脱氧鸟苷的提取方法的关注少，仅使用单一溶剂对样品进行提取。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法，以解决现有技术中的8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测中提取率低的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的第一个方面，提供了一种8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法，该检测方法包括：S1，利用UPLC-MS/MS联用建立8-羟基-2-脱氧鸟苷的浓度和峰面积的标准曲线；S2，用提取液对待测样品进行前处理，获得待检测液；S3，采用UPLC-MS/MS联用对待检测液进行检测，得到8-羟基-2-脱氧鸟苷的离子谱峰；根据标准曲线和离子谱峰换算得到待测样品中的8-羟基-2-脱氧鸟苷的含量；提取液包括75～85v/v％甲醇水溶液。

进一步地，S2包括：向待测样品中加入提取液，混合，离心，取上清液；将上清液过固相萃取柱，流出液即为待检测液；优选地，待测样品为如下任意一种：肌肉或尿液；优选地，待测样品为固体时，在加入提取液前，将待测样品进行剪碎、研磨或粉碎匀浆；优选地，研磨包括在液氮条件下研磨。

进一步地，固相萃取柱包括HLB固相萃取柱。

进一步地，提取液包括同位素内标；优选地，同位素内标包括胆酸-D4；优选地，提取液中的同位素内标的浓度为200ng/mL；优选地，提取液的添加量为每克待测样品中加入2～5mL提取液，更优选为3mL。

进一步地，UPLC-MS/MS联用所用的色谱柱为C18色谱柱；优选地，流动相包括A相和B相，A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸甲醇溶液，同时含有A相和B相时，A相和B相的体积比为0:100～95:5；优选地，UPLC-MS/MS联用采用的离子源为电喷雾电离源；优选地，离子源的电压为4500V或-4500V；优选地，离子源的温度为550℃。

进一步地，S3中采用梯度洗脱，梯度洗脱过程中，流动相自初始流动相开始以A相逐渐减小B相逐渐增加的方式进行梯度变化，至B相占比为100％，并以与初始流动相相同组成的流动相洗脱结束梯度洗脱，初始流动相中所A相与B相的体积比为95:5；优选地，梯度洗脱的流速为0.2～0.5mL/min，更优选为0.3mL/min。