[发明专利]一种山羊角特征肽段及其检测方法

权利要求书

1.一种山羊角特征肽段，其特征在于，所述的特征肽段为：

特征肽段1：Gly-Pro-Ser-Leu-Ala-Gly-Val-Ser-Gly-Ser-Ala-Ser-Ser-Ile-Arg；

特征肽段2：Gly-Gly-Val-Ala-Cys-Gly-Gly-Leu-Thr-Tyr-Ser-Ser-Thr-Ala-Gly-Arg。

2.一种山羊角特征肽段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求1所述的2个山羊角特征肽段配成对照品溶液；

(2)将待检测角类动物药样品，用胰蛋白酶进行酶切后，将酶解液和步骤(1)山羊角特征肽段对照品溶液分别注入液质联用仪，以山羊角特征肽段为对照，采用多反应监测模式，选择的MRM条件为：特征肽段1：m/z 449.2三电荷→863.5，DP＝40.00，CE＝28.00、特征肽段2：m/z 757.4，双电荷→842.4，DP＝41.00，CE＝21.00，进行检测；如果检测出上述离子对，且离子的保留时间与山羊角特征肽段对照品一致，其子离子与对照品的子离子一致，则所述待检测样品中含有山羊角成分。

3.根据权利要求2所述的山羊角特征肽段的检测方法，其特征在于，所述的酶切方法如下进行：取待检测角类动物药样品20mg，加入1ml蛋白裂解液，匀浆3次，离心，取上清液，取1000μg蛋白，加入0.2M IAA溶液，避光放置，加入冷丙酮溶液，充分混匀后，冷藏，沉淀过夜；

取丙酮沉淀样品离心后，弃去上清，用冷丙酮洗涤沉淀一次，挥干沉淀，加入尿素溶液复溶，充分振摇，待沉淀完全溶解后加入Tris-HCl缓冲液，在各个角类样品中分别加入胰蛋白酶，恒温水浴孵育，即得。

4.根据权利要求3所述的山羊角特征肽段的检测方法，其特征在于，所述的酶切方法如下进行：取待检测角类动物药样品20mg，加入1ml蛋白裂解液，蛋白裂解液包括4％SDS，20mMDTT，50mM Tris-HCl，pH＝8.8；加入研磨珠，匀浆3次，每次60s，12000rpm离心20min，BCA测定蛋白质含量，取1000μg蛋白，加入25μl 0.2M IAA溶液，避光放置30min，加入5.5倍样品体积的80％冷丙酮溶液，充分混匀后至于-20℃冷冻沉淀过夜；

取丙酮沉淀样品，经过12000rpm离心20min后，弃去上清，用80％冷丙酮洗涤沉淀一次，挥干沉淀，加入200μl 8M尿素溶液复溶，充分振摇，待沉淀完全溶解后加入1400μl Tris-HCl缓冲液，使尿素浓度降至1M以下，在各个角类样品中分别加入0.1μg/μl的胰蛋白酶40μl，37℃恒温水浴孵育12h，即得。

5.根据权利要求3所述的山羊角特征肽段的检测方法，其特征在于，液质联用仪检测的液相条件为：色谱柱为1.7μm Waters C₁₈柱，规格为2.1μm×50mm，上样量为10μl，流速0.3ml/min，流动相A为0.1％甲酸，流动相B为0.1％甲酸乙腈，0～12min，5～20％B线性梯度洗脱，12～13min，20～5％B线性梯度洗脱，13～15min，5％B等度洗脱；采用三重四极杆质谱，质谱参数为：离子源温度500℃；电离电压5500V；脱溶剂温度500℃；离子源气体1，60psi；离子源气体2，60psi；MRM模式的离子对为：特征肽段1：m/z 449.2，三电荷→863.5，DP＝40.00，CE＝28.00、特征肽段2：m/z 757.4，双电荷→842.4，DP＝41.00，CE＝21.00。

6.根据权利要求2所述的山羊角特征肽段的检测方法，其特征在于，角类动物药包括山羊角、羚羊角、水牛角、牦牛角、黄牛角、猪蹄甲。