[发明专利]胞质不相容性因子CifA或CifB突变基因及蛋白

权利要求书

1.胞质不相容性因子CifA及CifB的突变基因及蛋白，所述亲本CifA及CifB蛋白来源于沃尔巴克氏体(Wolbachia)，其特征在于所述突变蛋白相对于亲本存在若干个氨基酸的突变。

2.权利要求1中的沃尔巴克氏体CifA及CifB蛋白在自然界中包含多种不同的变体，所述CifA及CifB突变蛋白来源于自然界中亲本CifA及CifB变体的任意一种或任意组合。

3.权利要求1或权利要求2中所述CifA及CifB突变蛋白，其特征是核苷酸序列分别为CidAST如SEQ ID NO.1所示，CidBST如SEQ ID NO.3所示，CinAST如SEQ ID NO.5所示，CinBST如SEQ ID NO.7所示。

4.权利要求1或权利要求2中所述CifA及CifB突变蛋白，其特征是包含但不限于权利要求3中所述突变蛋白。

5.权利要求1或权利要求2中所述CifA及CifB突变蛋白，其特征是可通过对氨基酸残基进行置换、删除、截短和插入等多种方法获得。

6.权利要求3的突变蛋白CidAST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示；突变蛋白CidBST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示。突变蛋白CinAST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.6所示。突变蛋白CinBST基因表达的蛋白，其特征是所述蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.8所示。

7.含权利要求3的突变蛋白CidAST基因的质粒，其特征是用下述方法构建：以黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)中SEQ ID NO.9所示的wMel CidA核苷酸序列及来自尖音库蚊(Culex pipiens)中SEQ ID NO.10所示的wPip CidA核苷酸序列为模板，以wPip CidA-CidB_ND1-ND2(wPip CidB核苷酸酸序列为SEQ ID NO.11所示，氨基酸序列为SEQ ID NO.12所示)及wMel CidA的结构为基础，其中A、B因子相互作用界面可以分成三个，将wPip CidA中参与CidA与CidB相互作用的氨基酸残基替换到wMel CidA上，设计出CidAST序列，如SEQ IDNO.1所示。以上述人工合成的SEQ ID NO.1为模板，以F1为正向引物，以R1为反向引物，经过PCR，得到的含有CidAST的基因序列，经酶切及T4 DNA连接酶连接，将突变蛋白CidAST基因构建到PET-22b载体上，得到PET-22b-CidAST质粒；以PET-22b-CidAST质粒为模板，以F2为正向引物，以R2为反向引物，进行PCR，得到第二种含有突变蛋白CidAST基因的序列，经酶切及T4 DNA连接酶连接，将突变蛋白CidAST基因构建到pRS425载体上，得到pRS425-CidAST质粒。

F1的核苷酸序列是SEQ ID NO.13所示；

R1的核苷酸序列是SEQ ID NO.14所示；

F2的核苷酸序列是SEQ ID NO.15所示；

R2的核苷酸序列是SEQ ID NO.16所示。