[发明专利]一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法

权利要求书

1.一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将SiO₂纳米颗粒超声分散于甲苯中，然后加入疏水硅烷和有机胺；在氮气保护下，搅拌回流；经离心分离，洗涤，干燥，得到具有界面活性的SiO₂纳米颗粒；

步骤2：将步骤1得到的具有界面活性的SiO₂纳米颗粒加入到有机溶剂中，超声分散均匀后获得油相体系；将转氨酶和辅因子加入到PBS缓冲溶液中，混合均匀后得到水相体系；将油水两相体系混合，经高速搅拌形成包封转氨酶和辅因子的粒径均一的油包水型Pickering乳液；

步骤3：将步骤2得到的油包水型Pickering乳液装入固定床反应器中，通过恒流泵从固定床上端输送反应物溶液，并向反应物溶液中添加辅酶再生物，产物从固定床下端收集。

2.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤1中SiO₂纳米颗粒的粒径为60-80nm；搅拌回流温度为60-120℃，搅拌回流时间为3～6h。

3.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤1中疏水硅烷为甲基三甲氧基硅烷、二氯二甲基硅烷或辛基三甲氧基硅烷；有机胺为正己胺或三乙胺。

4.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤1中SiO₂与疏水硅烷的摩尔比为1:0.06～1:0.6，疏水硅烷与有机胺的摩尔比为1:0.5～1:3。

5.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤2中有机溶剂为甲苯、正庚烷、己烷、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或辛烷；转氨酶为ATA-101～ATA-165及其突变体中的一种或多种；辅因子为磷酸吡哆醛、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

6.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤2中转氨酶的含量为10-500μL/mL PBS缓冲液；辅因子的用量为5-500mg。

7.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤2中PBS缓冲液与界面活性SiO₂的质量比为1:0.02～1:0.10；PBS缓冲液与有机溶剂的体积比为1:1～1:10。

8.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤2中高速搅拌转数为5000～10000rpm，Pickering乳液微滴的直径为5-300μm。

9.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤3中反应器温度为25～50℃，反应器流速范围为0.2～4mL/h。

10.根据权利要求1所述的一种转氨酶连续化反应制备手性胺的方法，其特征在于，所述步骤3中辅酶再生物为甲酸铵-甲酸铵脱氢酶、异丙胺、苯乙胺或2-辛胺。