[发明专利]具有促进烟株生长功能的微生物菌肥、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

分别制备解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001和枯草芽孢杆菌D23的发酵液；

将所述解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001发酵液和所述枯草芽孢杆菌D23发酵液混合制得具有促进烟株生长功能的复合微生物菌液；

将复合微生物菌液与助剂混合制得具有促进烟株生长功能的微生物菌肥，并使每克微生物菌肥中的有效活菌数为2.0×10⁸cfu/g-4.0×10⁸cfu/g。

2.根据权利要求1所述的具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，制备具有促进烟株生长功能的复合微生物菌液时，将所述解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001发酵液和所述枯草芽孢杆菌D23发酵液按照重量比为2∶1的比例混合，并使复合微生物菌液中的有效活菌数大于2.0×10⁹cfu/g。

3.根据权利要求1所述的具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，将复合微生物菌液与助剂混合制得具有促进烟株生长功能的微生物菌肥时，所述复合微生物菌液的重量百分数为10-20％，所述助剂的重量百分数为80-90％，所述复合微生物菌液的重量百分数与所述助剂的重量百分数之和为100％，并且所述复合微生物菌液与所述助剂混合后连续搅拌10min以上即制得具有促进烟株生长功能的微生物菌肥。

4.根据权利要求1所述的具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述助剂包括如下重量份的成分：3.5％聚谷氨酸4-6份，蒙脱石粉8-12份，凹凸棒4-6份，阳离子型聚丙烯酰胺1-2份，油枯型腐熟有机肥25-30份。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，分别制备解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001和枯草芽孢杆菌D23的发酵液包括如下步骤：

菌种活化：将－80℃条件下采用甘油保存的解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001和枯草芽孢杆菌D23保存液取0.1ml接种到10ml的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为30℃-37℃、转速为150rpm条件下活化培养36h-48h，得到解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001菌种和枯草芽孢杆菌D23菌种的活化培养液；

菌种纯化：采用灭菌接种环将活化培养液中的菌种接种到牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上，进行纯化划线培养，在温度为33℃-37℃的培养箱中培养1-3天，选取菌落特征符合功能菌种菌落特征的单一较大菌落作为活化后的种子菌落；

种子液制备：用无菌接种环刮取一环前一步中活化的种子菌落接种到50ml牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为33℃-37℃、转速为150rpm条件下活化培养54h-72h，得解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001和枯草芽孢杆菌D23的种子液；

发酵液制备：按照1‰的比例分别将解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001和枯草芽孢杆菌D23的种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，在温度为33℃-37℃，转速为160rpm/min条件下培养48h-60h分别得解淀粉芽孢杆菌YWF-17-0001和枯草芽孢杆菌D23的发酵液。

6.根据权利要求5所述的具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨液体培养基包括如下重量份的成分：牛肉膏1-2份、蛋白胨4-6份、氯化钠2-3份、水450-550份，并且所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的pH采用盐酸和氢氧化钠调节至6-8。

7.根据权利要求5所述的具有促进烟株生长功能的微生物菌肥的制备方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨固体培养基包括如下重量份的成分：牛肉膏1-2份、蛋白胨4-6份、氯化钠2-3份、琼脂7-15份、水450-550份，并且所述牛肉膏蛋白胨固体培养基的pH采用盐酸和氢氧化钠调节至6-8。