[发明专利]用于检测SLC22A5基因九种高频致病变异的荧光定量PCR引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测SLC22A5基因九种高频致病变异的荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，包括用于扩增SLC22A5基因八个高频致病变异位点的引物以及针对所述变异位点的MGB探针，所述八个高频致病变异位点含九种变异，所述引物的序列如SEQ ID NO.1-16所示，所述MGB探针的序列如SEQ ID NO.17-33所示。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针的5'端均标记荧光基团，所述探针的3'端均标记MGB。

3.根据权利要求2所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM、VIC、NED、CY5。

4.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述SLC22A5基因九种高频致病变异为NM_003060.3(SLC22A5):c.760CT、NM_003060.3(SLC22A5):c.428CT、NM_003060.3(SLC22A5):c.338GA、NM_003060.3(SLC22A5):c.1195CT、NM_003060.3(SLC22A5):c.51CG、NM_003060.3(SLC22A5):c.51AG、NM_003060.3(SLC22A5):c.844CT、NM_003060.3(SLC22A5):c.797CT及NM_003060.3 (SLC22A5):c.1400CG。

5.一种用于检测SLC22A5基因九种高频致病变异的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，包括用于扩增SLC22A5基因八个高频致病变异位点的引物、针对所述变异位点的MGB探针、DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液体系及ROX参比荧光染料；所述引物的序列如SEQ ID NO.1-16所示，所述MGB探针的序列如SEQ ID NO.17-33所示。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测反应包含8个PCR反应，所述8个PCR反应分别在独立的PCR管中进行。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，当DNA模板中含有所述九种高频致病变异的任何一种时，对应的反应孔中FAM和VIC双通道都出现明显的扩增曲线，且FAM通道和VIC通道的Ct值差距不大于1.0。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，对于野生型的位点，对应的反应孔中仅能观察到VIC通道出现明显的扩增曲线，且FAM通道无明显扩增曲线，或有微弱扩增曲线且双通道间Ct值相差大于2.0。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，当所述八个高频致病变异位点中的一个位点为纯合突变时，对应的反应孔中FAM通道出现明显的扩增曲线，且VIC通道无明显扩增曲线，或有微弱扩增曲线且双通道间Ct值相差大于2.0。