[发明专利]小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型的建立方法

说明书

本发明提供一种小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型的建立方法，涉及生物技术领域。本发明的建立方法，包括以下步骤：以C57BL/6小鼠作为供鼠，取供鼠的骨髓，用缓冲液冲洗骨髓腔，收集和过滤洗涤液，制成单细胞悬液，去除CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞，得到去除T细胞的骨髓细胞悬液；取供鼠的脾脏，研磨后用缓冲液清洗，收集和过滤洗涤液，制成单细胞悬液，得到脾脏细胞悬液；以BALB/c小鼠作为受鼠，对受鼠进行全身电离辐射，将去除T细胞的骨髓细胞悬液和脾脏细胞悬液输入受鼠体内，饲喂一段时间后，得到小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型。本发明可以成功建立小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型，建模成功率高、重复性好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型的建立方法。

背景技术

骨髓是造血谱系的起源，也是造血干细胞赖以生存的微环境。原发性骨髓纤维化是造血系统疾病，多见于老年人，以骨髓网状组织纤维增生为特征，表现为骨髓造血干细胞数量及功能异常，贫血、脾脏肿大、肝脾髓外造血等症状。绝大多数骨髓纤维化患者合并JAK2、MPL、CALR等基因突变。有研究认为，原发性骨髓纤维化发病机制主要是由造血干细胞基因突变导致其分化功能紊乱，巨核细胞功能异常活化，骨髓基质细胞产生大量胶原引起。

自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征等疾病也存在骨髓纤维化及造血功能异常的问题。最近研究表明，自身免疫性骨髓纤维化是一种不同于原发性骨髓纤维化的独特病理特征，不伴随基因突变及巨核细胞增生，而在骨髓中出现大量淋巴细胞浸润及自身抗体沉积。

目前，对自身免疫性骨髓纤维化的研究较少，其发病机制尚不清楚，因此建立合适的动物模型以研究发病机制及治疗方案具有重要意义。既往研究报道的骨髓纤维化模型如JAK2V617小鼠、Mybboo小鼠等多为原发性骨髓纤维化模型，未涉及自身免疫性骨髓纤维化模型。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型的建立方法，建立得到的小鼠模型具有明显的自身免疫性骨髓纤维化表现，而且该方法的建模成功率高、重复性好。

一种小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型的建立方法，包括以下步骤：

制备骨髓细胞悬液：取供鼠的骨髓，用缓冲液冲洗骨髓腔，收集和过滤洗涤液，制成单细胞悬液，去除CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞，得到去除T细胞的骨髓细胞悬液；

制备脾脏细胞悬液：取供鼠的脾脏，研磨后用缓冲液清洗，收集和过滤洗涤液，制成单细胞悬液，得到脾脏细胞悬液；

处理受鼠：对受鼠进行全身电离辐射，将所述去除T细胞的骨髓细胞悬液和脾脏细胞悬液输入受鼠体内，饲喂40～60天后，即得小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型。

上述建立方法，通过将移植MHC(主要组织相容性复合体)抗原不相合的供鼠的小剂量脾细胞与骨髓细胞一同回输给经致死剂量放疗的受鼠体内，成功构建得到小鼠自身免疫性骨髓纤维化模型，该模型的成功率高，重复性好，实践过程简单易行。

在其中一个实施例中，所述供鼠为7～9周龄小鼠。

在其中一个实施例中，所述受鼠为7～9周龄小鼠。

在其中一个实施例中，所述去除T细胞的骨髓细胞悬液的细胞浓度为0.8～1.2×10⁷个/mL。

在其中一个实施例中，所述脾脏细胞悬液的细胞浓度为0.8～1.2×10⁶个/mL。

在其中一个实施例中，电离辐射的辐射总剂量为750～850cGy，时长为8～10h。