[发明专利]一种负载脐带间充质干细胞的温敏型水凝胶及其制备方法

说明书

本发明提出了一种负载间充质干细胞的温敏型水凝胶的制备方法，其具体过程如下：分离并迭代培养脐带间充质干细胞以获取合格的细胞库细胞，负载所得细胞库细胞于原位温敏生物医用水凝胶之上，于所述温敏型水凝胶中最终细胞浓度为3×10⁶个/mL。本发明采用温敏水凝胶的生物大分子化和非自由基交联机制，制备新型水凝胶制剂；以对干细胞的相容性和相变温度为指标，筛选温敏型原位凝胶处方与工艺。创新性的把间充质干细胞与水凝胶进行结合，制成新型的水凝胶制剂，实现脐带间充质干细胞在创伤部位的滞留，更好的发挥间充质干细胞的损失修复作用。

技术领域

本发明涉及一种负载脐带间充质干细胞的温敏型水凝胶及其制备方法。

背景技术

宫腔粘连(intrauterine adhesions，IUA)是由于宫腔手术操作、感染等因素导致子宫内膜基底层损伤，宫腔部分或全部闭塞，继而引起月经过少、闭经、不孕或反复流产等症状的妇科疾病，严重影响女性的生殖健康。

目前临床上治疗IUA的首选方法是宫腔镜下粘连分离术(TCRA)。TCRA术后子宫腔内存在分离创面，容易出现再次粘连的风险，发生率为62.5％。故临床上提出使用宫内屏障来隔离创面，起到预防再粘的作用。目前临床上用于TCRA术后的宫内屏障包括宫内节育器(IUD)或Foley球囊、生物胶类、羊膜等。

IUD用于宫腔粘连分离术后防止复发已有多年历史，但IUD具有以下缺点：含铜节育器能加重分离面的炎症、接触面积较小、可引起异常子宫出血、感染，严重者可导致子宫穿孔。Foley导管球囊相对IUD来说，不含金属成分，且其表面积大，但其也存在异物不适感、感染、压迫宫腔导致子宫内膜缺血坏死、子宫穿孔等风险。随着医用生物材料技术的发展，各种生物胶类如含有几丁糖、透明质酸钠等的水凝胶用于TCRA术后防粘连的效果令人满意，负载药物的水凝胶具有良好的生物相容性和生物安全性、能促进伤口的愈合、有一定的抑菌作用以及抑制瘢痕的作用，能有效减少组织粘连的发生。

近年来有关间充质干细胞在子宫内膜损伤修复的报道逐渐增多，这为IUA的临床治疗提供了新的治疗思路。大量的研究报道间充质干细胞可以促进子宫内膜再生和修复，减少子宫内膜纤维化，可以释放营养因子和生长因子并具有抗炎，免疫调节作用。由于宫腔和阴道相连，因此注入的干细胞具有外流的可能，将影响治疗效果。为此，实现脐带间充质干细胞在创伤部位的滞留是提高脐带间充质干细胞临床疗效的重要途经。水凝胶是当前最为接近人体软组织的生物医用材料，无论是作为创面封闭还是药物载体或细胞支架都具有重大的临床应用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，本发明提出了一种负载间充质干细胞的温敏型水凝胶及其制备方法，由可降解胶原和多糖生物支架支撑的温度敏感型原位水凝胶被移植到患者的子宫腔中，修复和再生受损组织。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种负载间充质干细胞的温敏型水凝胶的制备方法，其具体过程如下：分离并迭代培养脐带间充质干细胞以获取合格的细胞库细胞，负载所得细胞库细胞于原位温敏生物医用水凝胶之上，于所述温敏型水凝胶中最终细胞浓度为3×10⁶个/mL。

进一步地，构建所述原位温敏生物医用水凝胶包括如下步骤：

S1、纤维蛋白凝胶制剂：溶解冻干的人纤维蛋白原于氯化钠溶液中，溶解凝血酶于氯化钙溶液之中，等体积混合上述溶液并于37℃环境下振荡过夜形成溶液A；

S2、分别溶解海藻酸钠以及Ⅰ型胶原蛋白于去离子水中，生成浓度为2％的海藻酸钠溶液以及浓度为1％的Ⅰ型胶原蛋白溶液，等体积混合上述溶液形成溶液B；

S3、混合50mM的CaCO₃溶液以及150mM葡萄糖酸-δ-内酯溶液，形成溶液C；

S4、等体积比混合溶液A、溶液B以及溶液C，反应15min获得质量分数为0.25％Col：0.5％SA的水凝胶溶液。