[发明专利]一种鉴定果桑品种粤椹大10的分子标记、鉴定引物组、试剂盒和应用

权利要求书

1.一种用于鉴定果桑品种‘粤椹大10’的SSR分子标记，其特征在于，包括SSR分子标记M8179和/或M10360；所述的SSR分子标记M8179的重复基序为(GA)n，其中n≥7，其右侧序列如SEQ ID NO.6所示，其左侧序列如SEQ ID NO.5所示；所述的SSR分子标记M10360的重复基序为(AT)n，其中n≥6，其右侧序列如SEQ ID NO.8所示，其左侧序列如SEQ ID NO.7所示。

2.一种用于鉴定果桑品种‘粤椹大10’的SSR分子标记的核心引物组，其特征在于，包括针对SSR分子标记M8179的引物和/或针对SSR分子标记M10360的引物：

所述的针对SSR分子标记M8179的引物：

M8179-F：5’- AGCTCAAGGAGAATGTTATGCTG -3’；

M8179-R：5’- TGCCAGGGCTTCTTTATTAATTT -3’；

所述的引物M8179-F的5’端标记有荧光报告基团；

所述的针对SSR分子标记M10360的引物：

M10360-F：5’-GAGTTCTTGAGGGGAAAGAGAAA-3’；

M10360-R：5’-AATTCCTGTGATCATCTGCCTTA-3’；

所述的引物M10360-F的5’端标记有荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定果桑品种‘粤椹大10’的SSR分子标记的核心引物组，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM、HEX、TAMRA或ROX。

4.一种用于鉴定果桑品种‘粤椹大10’的快速检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求2或3所述的SSR分子标记的核心引物组。

5.一种利用SSR分子标记鉴定果桑品种‘粤椹大10’的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测果桑样品的基因组DNA；

（2）以步骤（1）提取的基因组DNA为模板，分别利用权利要求2或3所述的引物对M8179-F/M8179-R和M10360-F/ M10360-R进行PCR扩增；

（3）对步骤（2）中的PCR扩增产物进行分型，对分型结果进行条带判别；若以引物对M8179-F/M8179-R为引物扩增得到的PCR扩增产物只有128 bp和136 bp两条特异性条带，以引物对M10360-F/M10360-R为引物扩增得到的PCR扩增产物只有168 bp和170 bp两条特异性条带，则表明待测果桑样品为‘粤椹大10’，否则，则表明待测果桑样品为非‘粤椹大10’。

6. 根据权利要求5所述的利用SSR分子标记鉴定果桑品种‘粤椹大10’的方法，其特征在于，步骤（2）所述的PCR扩增，其反应体系为20 μL，包括：50 ng/μL DNA模板0.5 μL、10×PCR buffer 2 μL、25 mM MgCl₂ 2 μL、10 mM dNTPs 0.5 μL、5 U/μL Taq DNA聚合酶0.2 μL、10 μM上游引物0.5 μL、10 μM下游引物0.5 μL和ddH₂O 13.8 μL；步骤（2）所述的PCR扩增，其反应程序为：95℃预变性5 min；95℃变性30 s，60℃退火30 s，每个循环降1℃，72℃延伸30 s，循环10次；94℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸30 s，循环30次；最后72℃延伸5 min。

7.权利要求2或3所述的核心引物组或权利要求4所述的快速检测试剂盒在鉴定果桑品种‘粤椹大10’中的应用。