[发明专利]一种负载MSCs可注射自修复水凝胶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

包括以下步骤：

步骤一、合成四臂聚乙二醇苯甲醛：

将聚乙二醇、4-甲酰苯甲酸、4-二甲氨基吡啶溶解于四氢呋喃中，充氮气下加入N,N'-二环己基碳酰亚胺，上述溶液在室温下搅拌反应24h，透析并干燥后洗涤，得到四臂聚乙二醇粉末；

步骤二、合成羧甲基壳聚糖：

将壳聚糖溶解于异丙醇中，并于室温中均匀搅拌；将氢氧化钠溶液滴加到上述溶液中，继续搅拌30min；将水一氯乙酸逐滴加入上述溶液；混匀后在60℃条件下搅拌反应3h；洗涤干燥获得羧甲基壳聚糖粉末；

步骤三、制备负载MSCs水凝胶：

将聚乙二醇苯甲醛溶解于细胞完全培养基中，得到聚乙二醇苯甲醛溶液；将羧甲基壳聚糖溶解于细胞完全培养基中，搅拌溶解后得到羧甲基壳聚糖溶液；制备聚乙二醇苯甲醛溶液或/和制备羧甲基壳聚糖溶液的细胞完全培养基含有MSCs；分别量取相同体积的聚乙二醇苯甲醛溶液和羧甲基壳聚糖溶液，混合均匀得到负载MSCs可注射自修复水凝胶。

2.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤一中，所述聚乙二醇、4-甲酰苯甲酸、4-二甲氨基吡啶与N,N'-二环己基碳酰亚胺的质量比为6∶2∶0.01∶3.5。

3.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤二中，所述壳聚糖、异丙醇、氢氧化钠、水一氯乙酸的用量比为5g∶50mL∶0.25mol∶50mL。

4.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤三中，细胞完全培养基为DMEM-F12培养基，DMEM-F12培养基的组成为10％FBS和1％P/S。

5.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤三中，负载MSCs可注射自修复水凝胶中MSCs的负载细胞量为10⁶/mL。

6.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤三中，聚乙二醇苯甲醛溶液的浓度为8w/v％；

羧甲基壳聚糖溶液的浓度为3w/v％。

7.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤一中，洗涤方式为在乙醚中洗涤三次。

8.根据权利要求1所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶的制备方法，其特征在于：

其中，步骤二中，洗涤方式为用甲醇和乙醇分别洗涤3和2次，干燥方式为冷冻干燥。

9.如权利要求1-8任意一项所述制备方法制得的负载MSCs可注射自修复水凝胶。

10.如权利要求9所述的负载MSCs可注射自修复水凝胶在制备治疗组织再生或自身免疫性疾病药物中的应用。