[发明专利]可结合CD4的纳米抗体4NB357及其应用

说明书

本发明涉及一种可结合CD4的纳米抗体4NB357，包括3个互补决定区CDR1‑3，序列如SEQ ID NO:1‑3所示。本发明通过制备CD4蛋白、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等，筛选到特异性结合CD4的纳米抗体VHH，鉴定了其CDR序列，并构建了人源化抗体；并利用评估抗体在治疗HIV感染的疗效。本发明利用CD4结合的纳米抗体为HIV感染的临床治疗以及CD4淋巴瘤的临床治疗提供潜在的纳米抗体新药，双靶向抗体新药，基因治疗新药以及CAR细胞治疗等。

技术领域

本发明涉及生物医药领域。更特别地，涉及一种可结合CD4的纳米抗体，还涉及所述纳米抗体在制备HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物和诊断剂中的应用。

背景技术

CD4是T细胞表面上表达的重要受体分子，但同时也是病毒例如HIV等攻击T细胞的靶点。报道，HIV主要通过包膜表面的糖蛋白gp120与宿主细胞表面的特定受体（例如CD4）接触而影响病毒进入细胞的过程。抑制gp120和CD4的结合，可以有效地抑制HIV-1对宿主细胞的感染。另外，由于T细胞肿瘤也表达CD4。因此，可考虑以CD4为靶点，利用抗CD4抗体来治疗HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤。

1993年，一种来源于骆驼科的新型天然抗体被发现。该抗体天然缺失轻链而只由重链组成，其重链包含两个恒定区（CH2和CH3）、一个铰链区和一个重链可变区（Variableheavy chain domain，VHH，即抗原结合位点），该重链可变区的相对分子质量约为13 KDa，仅为常规抗体的1/10，且分子高度和直径均在纳米级别，是目前可获得的最小的功能性抗体片段，因此又被称为纳米单抗（Nanobody，Nb）。因纳米单抗稳定性高（90℃条件下仍不会降解）、亲和力高、与人源抗体同源性超过80%、毒性和免疫原性均较低等特点，最近纳米单抗被广泛用于免疫诊断试剂盒研发、影像学研发以及针对肿瘤、炎症、传染病和神经系统疾病等领域的抗体药物研发。

我们期望通过新的技术手段，筛选出获得能够结合CD4的抗体，为预防和治疗CD4相关疾病例如HIV感染或CD4阳性T细胞肿瘤等提供潜在新药。

发明内容

本发明通过用抗原免疫骆驼，获取骆驼源纳米单抗及其VHH，用于治疗HIV感染的病人。基于这些研究，本发明提供了一种可结合CD4的纳米抗体，其特征在于，包括3个互补决定区CDR1-3，序列如SEQ ID NO:1-3所示。

在一个具体实施方案中，所述纳米抗体还包括4个框架区FR1-4，所述FR1-4与所述CDR1-3按顺序交错排列。例如，可将FR1-4序列设计为如SEQ ID NO:4-7所示（羊驼源），但本发明的范围不限于此。抗体的特异性识别和结合能力主要由CDR区序列决定，FR序列影响不大，可根据物种来设计，这是本领域公知的。可设计人源、鼠源或骆驼源的FR区序列来连接上述CDR，从而得到一个可结合CD4的纳米抗体。

在一个具体实施方案中，所述纳米抗体为骆驼源的VHH或人源化的VHH。

本发明还提供了上述纳米抗体在制备CD4检测剂中的应用。

本发明还提供了上述纳米抗体在制备HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物中的应用。

本发明还提供了上述纳米抗体在制备针对HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的CAR-T治疗剂中的应用。

本发明还提供了编码上述纳米抗体的核酸。

本发明还提供了上述核酸在制备HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物中的应用。