[发明专利]一种猫干扰素活性的检测方法

说明书

本发明提供了一种猫干扰素活性的检测方法，该方法通过在检测体系中加入黄芩、拉米夫定两种药物，并在高糖型DMEM培养基环境下，可提高检测体系对猫干扰素的敏感性，解决了现有细胞系猫干扰素检出限过高的问题。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体是涉及一种猫干扰素活性的检测方法。

背景技术

干扰素(interferon，IFN)是由病毒及其它诱导因素刺激机体产生的一种具有抗病毒、影响细胞生长、免疫调控等多种生物学活性的细胞因子。干扰素分为Ⅰ型和Ⅱ型两类，Ⅰ型干扰素包括IFNα，IFNβ，IFNε，IFNω，IFNτ等。Ⅱ型干扰素为IFNγ。

近年来，越来越多的人将猫作为宠物饲养，而猫的病毒病危害着猫的健康和生存，因此也受到了越来越多人的重视。目前抗病毒的药物，疫苗是预防和治疗猫病毒病的主要途径。猫干扰素omega(FeIFN-ω)属于I型干扰素，具有抗病毒，抗增殖和免疫调节功能。Ⅰ型干扰素通过共同的受体干扰病毒复制，阻碍 DNA的复制和蛋白质的合成，增强巨噬细胞表面主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex，MHC)Ⅱ类分子的表达和细胞活性，因此猫干扰素的活性强弱，直接影响了猫干扰素类抗病毒药物的治疗效果，在干扰素活性的检测时，常用的检测方法为微量细胞病毒抑制法，在Vero细胞，CRFK细胞，Hela细胞等细胞中，添加干扰素和病毒，反应后通过检测Reed-Muench法计算半数保护量来确定干扰素的活性。但目前采用的检测体系检测干扰素的活性往往不能达到检出限，其原因是干扰素本身的活性不高，亦或干扰素活性的检测受制于检测体系，导致检测过程中干扰素的不敏感，还尚待查明。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种猫干扰素活性的检测方法。

本发明的目的还在于克服传统方法检测出的干扰素的活性不高的技术缺陷。

本发明采用微量细胞病变抑制法检测猫干扰素的活性，在检测体系中添加了拉夫米定、黄芩，能够显著提升干扰素的活性。

为实现以上技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种猫干扰素活性的检测方法，该检测方法添加了拉米夫定和黄芩。

进一步的，该检测方法选用了高糖型DMEM培养基进行培养。

进一步的，该检测方法包括：

1)将含10％FBS的高糖型DMEM培养基铺96孔细胞板；

2)培养4～6h后加入干扰素，同时加入拉米夫定和黄芩，37℃培养24h；

3)弃去培养上清，每孔接入VSV病毒，37℃培养24h；

4)显微镜下观察细胞病变程度，按Reed-Muench法计算半数保护量，即得到干扰素的活性(单位U)；

进一步的，拉米夫定含量为10～100μg/mL。

进一步的，黄芩含量为30～300μg/mL。

相对于现有技术，本发明具有以下优势：

本发明克服了传统方法检测出的干扰素的活性不高的技术缺陷。

本发明为进一步研究猫重组干扰素的生物学活性，为发掘其药物价值以及猫重组干扰素生物制剂的生产奠定了基础。

干扰素主要是通过诱导细胞合成各种AVP，产生抗病毒蛋白，阻碍病毒的复制和蛋白质的合成，从而破坏病毒增殖的路径，但工业化生产的干扰素，在进行常规的检测时，其生物学活性往往偏低，其原因是缺乏干扰素诱导细胞时所需的蛋白酶等物质，导致干扰素未被充分活化，只有少部分能与易感细胞表面受体结合，从而最终导致抗病毒蛋白产量骤减。本发明加入的拉米夫定和黄芩，具备协同增效的作用，能够激活干扰素，刺激干扰素表达，从而提高干扰素的活性。