[发明专利]抗氯胺酮特异性抗体、质粒载体及方法

说明书

本发明用KET‑BSA偶联物免疫小鼠，分离鼠脾脏淋巴细胞并通过流式细胞仪分选出与KET‑BSA偶联物特异性结合的B淋巴细胞，利用单细胞PCR扩增出B淋巴细胞中的抗体重链及轻链可变区序列，将得到的序列构建成完整鼠IgG抗体序列表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达单克隆抗体，纯化单克隆抗体，通过胶体金层析实验筛选出优势单抗，比传统单克隆抗体制备大大缩短了时间，并且得到的单克隆抗体稳定性高，均一性好，大大减小批间差异。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种抗氯胺酮特异性抗体、质粒载体及方法。

背景技术

氯胺酮即K粉，它具有严重的依赖性，成瘾性较传统毒品更为隐蔽，其娱乐性往往掩盖其成瘾性，随着频率及接触次数的递增后，逐渐形成初步的心理依赖。长期滥用氯胺酮会伤害泌尿系统、中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统、消化系统，以及记忆缺失、认知功能损害和精神病。氯胺酮就像猛虎一样吞噬着人们的健康，氯胺酮被世界大多数国家列入管制药物，我国也于2004年将其列为第一类精神管制药品。所以，能用于氯胺酮检测的特异性抗体的研究尤为重要。

发明内容

为实现上述设计目的，本发明的第一方面，提供了一种抗氯胺酮特异性抗体，包括轻链和重链，所述轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步的，编码如SEQ ID NO.1所示的所述轻链的可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；编码如SEQ ID NO.2所示的所述重链的可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明的第二方面，提供了一种质粒载体，该质粒载体含有如SEQ ID NO.5所示的轻链可变区核苷酸序列。

本发明的第三方面，提供了一种质粒载体，该质粒载体含有如SEQ ID NO.6所示的重链可变区核苷酸序列。

本发明的第四方面，提供了一种抗氯胺酮特异性抗体，包括轻链和重链，所述轻链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述重链的可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

进一步的，编码如SEQ ID NO.3所示的所述轻链的可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；编码如SEQ ID NO.4所示的所述重链的可变区氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

本发明的第五方面，提供了一种质粒载体，该质粒载体含有如SEQ ID NO.7所示的轻链可变区核苷酸序列。

本发明的第六方面，提供了一种质粒载体，该质粒载体含有如SEQ ID NO.8所示的重链可变区核苷酸序列。

本发明的第七方面，提供了一种抗氯胺酮特异性抗体真核表达质粒载体的方法，包括以下步骤:

a)通过PCR将轻链可变区核苷酸序列和重链可变区核苷酸序列分别与鼠IgG轻链恒定区核苷酸序列和重链恒定区核苷酸序列桥接后酶切，并分别连接质粒载体，构建真核细胞表达载体；

b)将步骤a)中真核表达载体转染至HEK293F细胞表达得到抗氯胺酮(KET)单克隆抗体；

c)纯化单克隆抗体，通过胶体金层析实验确定优势单抗；

所述轻链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示或如SEQ ID NO.7所示；

所述重链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示或如SEQ ID NO.8所示。

本申请的有益之处在于：提供了一种抗氯胺酮特异性抗体。

具体实施方案：