[发明专利]抗虫蛋白Cry 3Bb杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用

说明书

本发明公开了杂交瘤细胞株1G4 2D1及其产生的抗体和制备方法，所述杂交瘤细胞株1G4 2D1，已于2021年5月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22343，所述杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：a)通过原核表达得到Cry 3Bb重组蛋白；b)免疫动物：将Cry 3Bb重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5‑7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存，所述杂交瘤细胞株分泌的单抗为实现抗虫蛋白Cry 3Bb转基因作物中的检测奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，抗虫蛋白Cry 3Bb杂交瘤细胞株1G4 2D1及其产生的抗体和应用。

背景技术

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种广泛存在的革兰氏阳性菌，该菌分泌的抗虫晶体蛋白是目前主要的生物农药；分泌的抗虫蛋白按照氨基酸序列相似性被分为两类：Cry和Cryδ-内毒素。其中Cry蛋白对多种有害昆虫(如鳞翅目，双翅目，鞘翅目，线虫类和原生生物等)幼虫具有毒性。Cry毒素已经被转入农作物使其具有抗虫性。Cry 3Bb蛋白是Cry毒素中的一种。目前转Cry基因的农作物主要有玉米、土豆、水稻、棉花等。

转基因技术的发展与进步推动了生物学的发展。转基因食品虽然能够满足人们对产量、抗虫性等方面的要求，但同时也对人类的生活带来了一些潜在的威胁，如某些基因导入宿主之后会使食品产生毒性，转基因食物产生过敏原，使人产生抗药性，食品的营养价值发生改变等。在进行转基因食品研究开发和商业化的同时，为了对转基因食品的安全性给予综合评估，使消费者能够快速区分转基因食品与天然食品，建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物安全管理，保障人和动物以及微生物的安全，同时能够保护生态环境，促进农业转基因生物技术的进一步研究。为了对转基因作物及其衍生物中Cry 3Bb蛋白进行快速分析，研究并得到抗Cry 3Bb蛋白的单克隆抗体具有非常大的意义。。

发明内容

本发明的目的在于提供一种杂交瘤细胞株1G4 2D1及其产生的抗体和制备方法，其分泌的单抗为实现抗虫蛋白Cry 3Bb在转基因作物中的检测奠定基础。

为实现上述目的，本发明提供了杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的生物保藏编号为CGMCC No.22343。

具体的，杂交瘤细胞株的制备方法包括以下步骤：

a)通过原核表达得到Cry 3Bb重组蛋白；

b)免疫动物：将Cry 3Bb重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；

c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；

d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。

其中，小鼠的脾细胞与SP2/0细胞的融合比例为1:5-1:10。

本发明还提供一种前述的杂交瘤细胞株所产生的单克隆抗体，将杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水，然后进行Protein A-琼脂糖亲和层析柱纯化，得到单克隆抗体。

具体的，杂交瘤细胞株1G4 2D1所产生的单克隆抗体通过间接ELISA检测所得到的效价为1:2800000。

杂交瘤细胞株1G4 2D1所产生的单克隆抗体可变区重链氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示序列，轻链氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示序列，所示序列为：