[发明专利]一株高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明公开了一株高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用。菌株LX‑6分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）LX‑6，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日：2021年11月22日，保藏登记号为CCTCC No:M20211457。所述的解淀粉芽孢杆菌产高效蛋白酶，根据SB/T 10317‑1999蛋白酶活力测定法测定，其蛋白酶活力达1390.6±12.5 U/mL，利用此菌株进行豆粕固态发酵，SDS‑PAGE检测表明24h后豆粕中的大分子蛋白显著降解，48小时后不见大豆抗原蛋白，在利用微生物法固态发酵豆粕领域达到领先水平。利用B.amyloliquefaciens LX‑6的高产蛋白酶活力，对豆粕等饲料中的大分子蛋白有较显著的降解能力，降低饲料中的抗营养因子，对提高饲料消化吸收率和使用效益，降低养殖成本，具有巨大的应用潜力。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，涉及一株产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌LX-6及其在降低豆粕等饲料中的粗蛋白、减少抗营养因子等方面的应用。

背景技术

豆粕是目前使用最为广泛的饲料工业原料，与动物源性蛋白饲料相比，具有货源充足、含毒害物质概率低、安全系数高等特点，是作为饲料的理想材料。近年来，水产养殖业发展迅猛，水产饲料蛋白源匮乏日趋严重，水产动物不同于畜禽等单胃动物和反刍动物，其对营养物质的需求、摄取、消化与吸收等方面都有较高需求。国内外诸多学者发现大豆具有良好的营养品质，大豆粕等大豆制品可作为鱼粉代用品用于水产饲料。豆粕含有大量蛋白质，但其蛋白质分子结构复杂，相对分子量较大，存在抗营养因子等问题。尤其是大豆抗原蛋白(大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白)对水产动物健康的有害影响更为显著，主要体现在延缓生长速度、降低营养物质消化，大大降低了动物对豆粕营养的吸收利用，影响了豆粕的使用价值和应用范围。

为实现豆粕的高效利用，在使用过程中，常需通过一些方法降低豆粕中的部分致敏因子和抗营养因子，如利用膨化、蒸煮可使其热敏因子失活，大豆蛋白部分分解，胰蛋白酶抑制因子活性降低等。相关研究表明，利用微生物发酵可提高豆粕的营养价值。一方面微生物可以有效降解抗营养因子；另一方面，降解大分子蛋白质产生的小肽在肠道中容易和矿物元素结合成可溶性的鳌合物而促进无机盐离子的吸收。由于芽孢杆菌具有生长周期短、发酵成本低廉，其发酵豆粕粗蛋白含量高等优点，利用芽孢杆菌生产发酵豆粕已成为研究趋势。刘星等利用枯草芽孢杆菌发酵，豆粕总蛋白从45.28%提高至48.37%。高蛋白酶活性是芽孢杆菌生产发酵豆粕的关键。郑丽等人筛选到一株产蛋白酶芽孢杆菌，产蛋白酶水平维持在500-700 U/mL，发酵豆粕60 h后仍有部分粗蛋白未能降解。

刘星，赵荣，李波，等. 几种不同菌种发酵豆粕发酵过程指标对比. 动物营养.2020,1:20-23.

郑丽，李达，牛红红，等. 产蛋白酶芽孢杆菌的筛选及其发酵对豆粕的影响. 食品科学. 2019,40(20):185-191。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于通过筛选提供具有较强蛋白酶活性的一株芽孢杆菌——解淀粉芽孢杆菌（ Bacillus amyloliquefaciens）LX-6。

本发明的第二个目的是利用 B. amyloliquefaciensLX-6高蛋白酶活性，固态发酵豆粕以降解其中大分子蛋白，降低抗营养因子，提高豆粕的使用价值。

本发明的目的是通过以下技术手段得以实现：