[发明专利]一种产纤维素酶菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种产纤维素酶菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：原料准备：采集土壤样本，并对样本进行处理；

S2：准备：按照配方配制CMC培养基，并对需要使用的装置进行处理；

S3：梯度稀释：对土壤溶液进行梯度稀释；

S4：涂布及培养：将稀释液进行涂布并培养，同时记录菌株的形态及特征；

S5：初步筛选：通过培养基的特定反应对菌株进行初步筛选；

S6：复筛：通过培养基的特定反应对菌株进行二次筛选；

S7：测定：对筛选出的菌株的酶的活性进行测定。

2.根据权利要求1所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，其特征在于，所述S1中，采集山上距湿润的表层10cm处的土壤样本40-50g,用研钵研成粉末后称取1g样本加入灭菌的250mL锥形瓶中，并加入99mL无菌水摇匀静置。

3.根据权利要求1所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，所述S2中，按照配方配制200mLCMC培养基，并选取1X250mL空锥形瓶和6X15mL试管塞上棉塞并用报纸、棉线包扎成一捆，同时取12套培养皿码齐包扎，并将1只1000mL的锥形瓶各入无菌水1000mL，加棉塞后与CMC培养基一起灭菌20min。

4.根据权利要求3所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，所述CMC培养基是将CMC5g、蛋白胨1g、FeSO4·7H₂O 0.005g、NaCl 0.25g、琼脂粉10g混合于1000mL锥形瓶中，并加蒸馏水至500mL，调节pH为7.2-7.6，调节后加棉塞在121℃环境中灭菌20min。

5.根据权利要求1所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，所述S3中，在无菌台上倒置9个CMC培养基备用，另取6支15mL经灭菌的试管，用移液枪吸取土壤溶液中的上清液1mL加入1号试管，同时加无菌水9mL，混匀后吸取1mL混合液加入2号试管，重复上述操作直至进行6次梯度稀释。

6.根据权利要求1所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，所述S4中，待CMC培养基冷却后，在超净工作台分别吸取10⁴、10⁵、10⁶的倍稀释液0.1mL放于CMC培养基上进行稀释涂布，其中每种稀释液涂布三份，将涂布后的培养基置于37℃培养箱中培养24小时并标记菌落并记录各菌落形态、菌落高度、质地、颜色、气味、着生状态、边缘及表面纹理。

7.根据权利要求1所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，所述S5中，配制200mL刚果红鉴别培养基与三套培养皿一起在121℃环境中灭菌20min，其中刚果红培养基是由(NH4)₂S0₄2g、MgS0₄·H₂00.5g、K₂HP0₄ 1g、NaCl 0.5g、微晶纤维素2g、刚果红0.4g和琼脂20g混合后加水至1000mL，另取1只250mL空锥形瓶、6支15mL试管和12套培养皿灭菌备用，在无菌操作台上倒置3个鉴别培养基备用，将各菌落用牙签接种到冷却了的刚果红鉴别培养基上，在37℃环境中培养24h，培养完成后挑选5株透明圈直径与菌落直径比最大的菌株进行摇瓶复筛。

8.根据权利要求1所述的一种产纤维素酶菌株的筛选方法，所述S6中，进行复筛时，配制500mL基础发酵培养基分装到5只250mL的锥形瓶中，并在121℃环境中采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，其中灭菌时间为20min，将初筛得到的菌株用接种环接种在纤维素培养基上，在37℃、150r/min下培养2-3天，培养完成后放入4℃冰箱保藏。