[发明专利]一种具有镇痛作用的乌头属植物二萜生物碱的高效细胞筛选方法

权利要求书

1.一种具有镇痛作用的乌头属植物二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于通过下列工艺步骤实现：

（1）选取小胶质细胞作为筛选细胞，用含10%FBS的DMEM高糖培养基进行培养；

（2）将处于生长对数期的细胞消化，制成细胞悬液，血球计数板计数后调整细胞密度，接种于孔板中，置于培养箱中进行培养；

（3）贴壁后，弃去细胞上清液，加入含有乌头属二萜生物碱的培养基，继续培养2~8h；

（4）收集细胞上清液及细胞检测强啡肽基因和蛋白的表达，根据强啡肽表达水平筛选出具有镇痛潜力的乌头属二萜生物碱；

（5）根据细胞筛选结果，将筛选出的部分乌头属二萜生物碱在动物疼痛模型上验证其镇痛作用。

2.根据权利要求1所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（1）中的小胶质细胞是指HAPI小胶质细胞系。

3.根据权利要求1所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（2）中所述消化是指在弃去培养液后加入胰蛋白酶（0.25%EDTA）30~40s，再用移液枪将部分还贴壁的细胞吹下后弃去胰蛋白酶；所述制成细胞悬液是指用移液枪吹打细胞制成细胞悬液。

4.根据权利要求1或3所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（2）中所述调整细胞密度为5×10⁵个/ml。

5.根据权利要求1所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（3）中乌头属二萜生物碱溶液是指将二萜生物碱粉末溶解在DMSO中，再用培养基将浓度稀释到相应浓度，用量为1~30µmol/L。

6.根据权利要求1或5所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（3）中培养时间为2~8h。

7.根据权利要求1所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（4）中待测药物样品使强啡肽表达水平比不加待测药样品的正常对照组显著增加（p0.05），则可判定该样品具有作为镇痛药物的潜力。

8.根据权利要求1所述具有镇痛作用的乌头属二萜生物碱的高效细胞筛选方法，其特征在于所述步骤（5）中动物模型是指完全弗氏佐剂所致大鼠炎性疼痛动物模型。