[发明专利]磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法质粒提取试剂盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；所述SⅠ溶液用于裂解细胞，释放核酸；所述SⅡ溶液用于将蛋白等杂质沉淀；所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述磁珠Ⅰ能够吸附蛋白等杂质沉淀，从而将其去除；所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ，用于结合质粒。本发明还提供了所述磁珠法质粒提取试剂盒的制备方法。本发明还提供了利用该试剂盒进行质粒提取的方法。

技术领域

本发明涉及核酸提取技术领域，具体涉及一种磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法。

背景技术

在分子生物技术中，核酸的提取也至关重要。经过长期的发展，提取核酸的方法有很多种，目前最常用的核酸提取方法是离心吸附柱提取和磁珠法提取。离心吸附柱提取质粒需要经过多次离心，难以实现自动化，并且受限于离心机对样本数量处理有一定限制。磁珠法核酸提取试剂盒配套自动化核酸提取仪能够实现核酸提取的自动化和高通量。但现阶段的磁珠法质粒提取方法，主要是用在菌体裂解离心除去大部分杂质后进行自动化提取，通过离心除去杂质这一步大幅增加了样本处理的人工成本，且限制了质粒提取的自动化范围。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种能够使质粒提取过程免于离心的磁珠法质粒提取试剂盒、制备方法及质粒提取方法，对实现质粒提取的全程自动化具有决定性的意义。

本发明的第一目的在于提供一种磁珠法质粒提取试剂盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；

所述SⅠ溶液中含有氢氧化钠、十二烷基硫酸钠和乙二胺四乙酸或其盐；

所述SⅡ溶液中含有钾盐和酸性pH调节剂；

所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述多羧基化合物中至少含有两个羧基；

所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ、醇和乙酸钠，所述磁珠Ⅱ用于结合核酸。

在其中一个实施例中，所述多羧基化合物选自柠檬酸、乙二胺四乙酸、酒石酸和这些化合物相应的盐中的一种或多种。

在其中一个实施例中，所述磁珠Ⅰ表面修饰的羧基基团通过在其制备过程中加入所述多羧基化合物得到。

本发明的第二目的在于提供所述磁珠法质粒提取试剂盒的制备方法，其包括将各组分按照配比分别混合。

在其中一个实施例中，所述磁珠Ⅰ溶液的制备方法包括：

将二价铁化合物、三价铁化合物和水混合，在无氧条件下，搅拌；

在搅拌后的混合物中加入氨水，在第一温度下进行反应，所述第一温度为50℃～120℃；

在所述第一温度反应后得到的产物中加入所述多羧基化合物和抗氧化剂，在第二温度下搅拌反应，所述第二温度为50℃～120℃；

将所述第二温度反应后得到的产物用水进行磁分离洗涤，直至洗涤液pH值为6.5～7.5；

将洗涤后的产物与含有所述多羧基化合物的溶液混合。

本发明的第三目的在于提供利用所述的磁珠法质粒提取试剂盒进行质粒提取的方法，包括以下步骤：

将含有菌液的样品与所述SⅠ溶液混合，得到第一混合液；

将所述第一混合液、所述SⅡ溶液和所述磁珠Ⅰ溶液混合，得到第二混合液；

对所述第二混合液进行磁吸分离，收集得到第一上清液；

将所述第一上清液与所述磁珠Ⅱ溶液混合，得到第三混合液；