[发明专利]一种太子参均一多糖的HPLC-FLD检测方法

说明书

本发明公开了一种太子参均一多糖的HPLC‑FLD检测方法，用2‑氨基联苯胺对太子参均一多糖进行荧光标记，以葡聚糖为标准品，采用HPLC‑FLD定量分析太子参均一多糖，用于生物样本细胞培养液中太子参均一多糖的测定。方法简单、灵敏、准确，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于多糖荧光检测技术领域，具体涉及一种太子参均一多糖的HPLC-FLD检测方法。

背景技术

多糖是构成生命科学的三大物质之一，广泛存在于中药之中。多糖具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗病毒等多种生物学活性，药理研究被广泛证实。

由于多糖缺乏生色团（UV条件下吸收很弱）所致的检测困难，使得糖类分子在生物化学领域研究一直无法突破，多糖在体内以何种分子形态吸收、转运、传递等机制一直不甚清楚。

多糖的检测通常用质谱或是还原端进行荧光标记后用荧光检测器进行检测，凡是具有半羧醛羟基的糖链都可以通过还原胺化反应来实现荧光衍生化。常用的荧光衍生化试剂2-氨基联苯胺（2-AB），适用性强，应用广泛，标记试剂盒已经商品化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种太子参均一多糖的HPLC-FLD检测方法，用2-氨基联苯胺对太子参均一多糖进行荧光标记，建立高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）检测方法，应用于生物样本细胞培养液的测定，研究其在Caco-2细胞的吸收转运特征。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种太子参均一多糖的HPLC-FLD检测方法，用2-氨基联苯胺对太子参均一多糖进行荧光标记，以葡聚糖为标准品，采用HPLC-FLD定量分析太子参均一多糖。

上述的检测方法在生物样本细胞培养液中的应用。

本发明的有益效果在于：用2-氨基联苯胺对太子参均一多糖进行荧光标记，建立高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）检测方法，应用于生物样本细胞培养液的测定，研究其在Caco-2细胞的吸收转运特征。方法简单且准确，应用前景广阔。

附图说明

图1为多糖2-ab的薄层色谱鉴别。左图T-1为太子参均一多糖，T-2为葡聚糖对照品，T-3和T-4为硼氢化钠和空白溶剂；中图显示2-AB标记后的葡聚糖T-500、T-70、T-40和T-10对照品荧光斑点；右图矩形显示2-AB标记后的均一多糖的荧光斑点，在每块TCL板中，最上面的斑点均为2-AB荧光斑点。

图2为2-AB衍生化多糖的化学结构。2-AB葡聚糖标准品（A），2-AB太子参均一多糖（B）。

图3为岀峰时间与logM的线性关系图。

图4为2-AB荧光标记的葡聚糖标准品和多糖样品的HPLC色谱图。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

一、太子参均一多糖（PHP）2-AB荧光标记

1. 2-AB-PHPs制备

取DMSO 350μL溶解350mg TBAF，加入120μL Ac。混匀后加入5mg 0.5M多糖，涡旋30min，65℃溶解1h，直至澄清；加入20mg 2-AB，混溶；加入10mg氰基硼氢化钠混匀，在65℃下孵育4h。薄层色谱图见图1，化学结构见图2A。

2. 2-AB-葡聚糖制备