[发明专利]纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗

说明书

本发明公开一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗，涉及兽用疫苗佐剂及其制备与应用技术领域。所述纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，包括以下步骤：S10、将液体油和固体脂质加热混合，得油相；S20、在加热条件下，将所述油相加入到含有表面活性剂的水相，混合均匀得预乳状液；S30、将所述预乳状液均质后冷却，得纳米结构脂质载体佐剂。本发明制得的纳米结构脂质载体佐剂，含生物安全性液体油相及免疫功能固体脂质，可有效提高抗原的免疫功能；该纳米结构脂质载体佐剂具有高比表面积，能有效的稳定疫苗抗原并起到缓释作用；该佐剂亦可有效增加免疫细胞的识别和吞噬，提高抗原递呈效率，且具有较好的生物相容性和安全性。

技术领域

本发明涉及兽用疫苗佐剂及其制备与应用技术领域，特别涉及一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗。

背景技术

疫苗佐剂也称佐剂或抗原佐剂，是一类自身不具备抗原特性的，但能够增强机体的非特性免疫能力及抗原的免疫原性的物质。佐剂是疫苗密不可分的一部分，佐剂的加入能够减少疫苗中抗原的用量，增强效应T细胞的反应和抗体滴度，更快的激发免疫保护。当与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。佐剂通过改变抗原的物理形状，延缓抗原降解和排除，延长抗原在机体内保留时间；刺激单核吞噬细胞对抗原的递呈能力；刺激淋巴细胞分化，增加扩大免疫应答能力等机制来增强机体的免疫应答。佐剂的使用可降低抗原的用量或接种剂量/次数，提高疫苗的免疫效力。

兽用疫苗佐剂中，矿物油佐剂在油乳佐剂中占居主导地位，如弗氏佐剂、白油佐剂、Montanide ISA 201等，其中白油佐剂仍然是目前兽用佐剂使用最为广泛的佐剂。白油佐剂主要由矿物油、span-80与硬脂酸铝加热溶解后形成的淡黄色油状液体，与抗原乳化呈W/O型乳液。它可以延缓免疫原在机体内的存留时间，使之持续缓慢释放，增强巨噬细胞的吞噬能力。由于其出色的免疫效果，以及成本优势，在兽用疫苗中使用非常广泛。但白油佐剂的缺点也是十分明显的，如易产生较强的副反应，局部反应严重，且矿物油于2012年被WHO列为一类致癌物质。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗，旨在制备一种安全、生物相容性好且能有效提高抗原免疫功能的纳米结构脂质载体佐剂。

为实现上述目的，本发明提出一种纳米结构脂质载体佐剂的制备方法，包括以下步骤：

S10、将液体油和固体脂质加热混合，得油相；

S20、在加热条件下，将所述油相加入到含有表面活性剂的水相，混合均匀得预乳状液；

S30、将所述预乳状液均质后冷却，得纳米结构脂质载体佐剂。

可选地，在步骤S10中，所述液体油包括角鲨烯和植物油中的至少一种。

可选地，在步骤S10中，所述固体脂质包括十六烷基甘油醚和十八烷基甘油醚中的至少一种。

可选地，在步骤S10中，

所述液体油和固体脂质的质量之比为1∶(0.1～0.3)；和/或，

所述加热温度为30～60℃；和/或，

所述混合时间为15～30min。

可选地，在步骤S20中，

所述表面活性剂包括吐温-80、月桂基葡糖苷、十聚甘油单油酸酯和六聚甘油单油酸酯中的至少一种；和/或，

所述加热温度为30～60℃。

可选地，在步骤S20中，油相的质量与所述表面活性剂的质量之比为1∶(2～5)。

可选地，在步骤S30中，所述均质为在6000～12000rpm下搅拌10～20min。