[发明专利]鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株及其制备方法、疫苗在审

专利信息
申请号: 202111582307.3 申请日: 2021-12-22
公开(公告)号: CN114807061A 公开(公告)日: 2022-07-29
发明(设计)人: 陈瑞爱;熊挺 申请(专利权)人: 华南农业大学
主分类号: C12N7/01 分类号: C12N7/01;C12N15/50;C12N15/86;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
代理公司: 广州三环专利商标代理有限公司 44202 代理人: 王建宇
地址: 510000 广东省广州市*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 传染性 支气管炎 标记 疫苗 及其 制备 方法
【说明书】:

发明公开了一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株的构建方法,其包括:(1)获取IBV‑Beaudette病毒基因组全长cDNA重组质粒;(2)构建A21963G沉默突变和G22170C沉默突变的IBV‑Beaudette病毒全长cDNA重组质粒;(3)转染细胞,拯救获得的病毒即为鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株。相应的,本发明还公开了一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株及疫苗。实施本发明,可得到具有Vero细胞适应性的A21963G和G22170C双位点沉默点突变的基因标记毒株,为IBV基因标记疫苗的研制提供参考。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域,尤其涉及一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株及其制备方法、疫苗。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis,IBV)感染引起的一种严重危害家禽养殖业的高传染性疾病。IBV主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿系统和消化系统。可造成雏鸡肾脏病变和输卵管永久性退化,从而导致肉鸡饲料报酬率降低,蛋鸡产蛋率和产蛋质量均下降。IBV属于γ-冠状病毒,1937年Beaudette等首次分离到该病毒,命名为 Beaudette。IBV是一种单股正链RNA病毒,基因组全长约为27.6kb,其5’端和 3’端各有一个非编码区(Untranslated region,UTR)3’UTR后具有PolyA尾。IBV 至少有10个明显的开放阅读框(ORF),分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白。现已确定的ORF的定位次序是5’1a-1b-S-3a-3b-E-M-5a-5b-N-3’。其5’端2/3 基因组编码具有活性的复制酶,3’端1/3基因组主要编码结构蛋白,包括纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)、核衣壳蛋白(N)和小膜蛋白(E)。其中S蛋白构成了IBV的最表层纤状突起,由S1和S2亚基构成,在病毒吸附细胞过程中发挥作用,决定病毒的组织嗜性,但并不是IBV毒力的唯一决定性因素。S蛋白是最重要的保护性抗原蛋白,其作用表现为刺激机体产生中和抗体。IBV的核酸 (全长mRNA)具有感染性。在辅助蛋白的协同下能在宿主细胞内有效复制,组装成病毒颗粒。

标记疫苗含有特殊的核酸序列,在疫检过程中能通过测序准确区分受检动物所携带的病毒是来自于疫苗接种还是自然感染,从而能更精准地配予相应防控措施。标记疫苗包括基因缺失、基因沉默突变、引入报告基因等。目前报道最多的标记疫苗发明有猪瘟病毒、新城疫和口蹄疫等,其中口蹄疫已有相应的标记疫苗上市应用,但IBV尚未标记疫苗相关报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于,提供一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株,其可有效区分受检动物所携带的病毒是来自于疫苗接种还是自然感染,为 IBV标记疫苗提供标记位点参考。

本发明还要解决的技术问题在于,提供一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株的制备方法。

本发明还要解决的技术问题在于,提供一种鸡传染性支气管炎标记疫苗。

为了解决上述技术问题,本发明提供了一种鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株的构建方法,其包括:

(1)获取IBV-Beaudette病毒基因组全长cDNA重组质粒;

(2)构建A21963G沉默突变和G22170C沉默突变的IBV-Beaudette病毒全长cDNA重组质粒;

(3)转染细胞,拯救获得的病毒即为鸡传染性支气管炎标记疫苗毒株。

作为上述技术方案的改进,步骤(1)中,分别获取pIBVcDNA-1A质粒、 pIBVcDNA-2B质粒、pIBVcDNA-3C质粒、pIBVcDNA-4D质粒和pIBVcDNA-5E 质粒。

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