[发明专利]一种高紫杉烷类富含性的红豆杉离体培养方法

权利要求书

1.一种高紫杉烷类富含性的红豆杉离体培养方法，其包括如下步骤：

（1）外植体材料的制备：以无菌红豆杉茎段切下作为起始外植体；

（2）将切下的外植体接入MS + 1-3mg/L 6-BA + 0.1-0.6 mg/LNAA +0.1-1 g/L脯氨酸的培养基中，培养3-5周；其中，6-BA与NAA比例为5~10：1；

（3）将步骤（2）基部吸收面扩大的芽苗转接到MS+1-5 mg/L 6-BA+0.2-0.3 mg/L NAA+0.1-0.5 g/L脯氨酸的培养基中，培养3-5周，诱导出具有一定同步效果的不定芽丛；

（4）选取步骤（3）具有一定同步效果的不定芽丛转接至DCR +0.5-2.5 mg/L 6-BA +0.05-0.2 mg/L NAA +0.5-2g/L活性炭的培养基中进行高频同步培养，培养6-8周，获得生长发育同步不定芽簇；

（5）将步骤（4）诱导的不定芽接种在不定芽伸长诱导培养基中，所述不定芽伸长诱导培养基中，基本培养基为含有2倍大量元素的DCR培养基，添加0.1-1 mg/L 6-BA和0.01-0.1mg/L NAA+ 1-3 g/L AC，培养3-4周；

（6）将步骤（5）中获得的伸长的不定芽转接到DCR + 0.1-1 mg/L 6-BA + 0.01-0.1mg/L NAA + 50-150 mg/L间苯三酚的培养基中培养4-8周；或者还包括下述步骤：

（7）将步骤（6）中获得的材料转接到DCR +0.1-1 mg/L 6-BA + 0.01-0.1mg/L NAA +1-3 g/L活性炭的培养中培养4-8周。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（2）步中，6-BA与NAA比例为5：1或10：1。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（3）步中，培养基中添加的6-BA 为2-3mg/L 6-BA，添加的脯氨酸为0.2-0.4 g/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（4）步中，采用的培养基是DCR培养基+1mg/L 6-BA +0.1mg/L NAA + 1 g/L AC。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（5）步中，所述不定芽伸长诱导培养基中，添加0.7 mg/L 6-BA、0.07 mg/L NAA和2 g/L AC。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（6）步中，培养基中添加0.7mg/L 6-BA、0.07 mg/L NAA和100 mg/L间苯三酚。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第（7）步中，培养基中添加0.5mg/L 6-BA、0.05 mg/L NAA和2 g/LAC。

8.如权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于，培养基添加蔗糖30 g/L，肌醇0.1g/L，琼脂粉5 g/L，调节培养基pH值为5.8。

9.如权利要求1至7任一项所述的方法，其特征在于，培养条件为25±2 ℃，光照强度2000-3000 lx，光照16 h/d。

10.一种制备紫杉烷成分的方法，其特征在于，采用如权利要求1至9任一项所述的方法制备得到红豆杉离体培养材料，以所述红豆杉离体培养材料为提取原材料，从中提取紫杉烷成分。

11.如权利要求10的方法，其特征在于，所述紫杉烷成分选自紫杉醇、Baccatin iii、10-DAT和/或10-DAB。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，以所述第（6）步获得的红豆杉离体培养材料提取Baccatin iii、10-DAB和/或10-DAT。

13.如权利要求11所述的方法，其特征在于，以所述第（7）步获得的红豆杉离体培养材料提取紫杉醇。