[发明专利]一种制备高聚合度壳寡糖的方法

权利要求书

1.一种制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于：向含有Mn²⁺的壳聚糖溶液中加入壳聚糖酶或含有壳聚糖酶的溶液，进行酶解，即得聚合度为3～6的壳寡糖；所述壳聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述壳聚糖溶液的浓度为6%～10%，溶质为2%～3%的醋酸溶液；

所述壳聚糖溶液中Mn²⁺的浓度为1～20 mmol/L；

所述壳聚糖酶的加酶量2～3 U/g壳聚糖；

所述酶解的温度为52～58℃，酶解时间为4～7 h。

2.根据权利要求1所述的制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于：所述壳聚糖溶液的浓度为6%、8%或10%，溶质为2%～3%的醋酸溶液；

所述壳聚糖溶液中Mn²⁺的浓度为2 mmol/L或5 mmol/L；

所述壳聚糖酶的加酶量2.5 U/g壳聚糖；

所述酶解的温度为55℃，酶解时间为6或7 h。

3.根据权利要求1所述的制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于，所述含有壳聚糖酶的溶液是通过以下方法制备得到的：向发酵培养基中接种能表达SEQ ID NO.1所示的壳聚糖酶的枯草芽孢杆菌或其种子液，进行发酵；发酵结束后，发酵液离心，得上清液，即为含有壳聚糖酶的溶液。

4.根据权利要求3所述的制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为：保藏编号为CGMCC No. 1. 14985的枯草芽孢杆菌，或导入了编码SEQ ID NO.1所示的壳聚糖酶的基因片段的重组枯草芽孢杆菌。

5.根据权利要求3所述的制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于，所述发酵培养基的组分组成为：1 %酵母粉，1 % (NH₄)₂SO₄，1 %预糊化淀粉，0.3 %壳聚糖，0.1% MgSO₄，余量为水。

6.根据权利要求5所述的制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于，所述预糊化淀粉是通过以下方法制备得到的：将温水与沸水按1:4的比例混合，处理马铃薯淀粉，得到预糊化淀粉。

7.根据权利要求3所述的制备高聚合度壳寡糖的方法，其特征在于，所述发酵的具体条件为：发酵温度30 ℃，发酵时间24 h，发酵过程中维持pH在6.9～7.1。

8.氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的壳聚糖酶在制备聚合度为3～6的壳寡糖中的应用。