[发明专利]具有抗炎功效的三重益生菌发酵复合物的制备方法和应用

说明书

本发明公开了具有抗炎功效的三重益生菌发酵复合物的制备方法和应用，属于微生物发酵技术领域。本发明的三重益生菌发酵复合物，由三株具有NO抑制率的益生菌发酵物双歧杆菌H1、植物乳杆菌H2、嗜酸乳杆菌H4发酵后提取的溶胞物，以2：1：3的比率混合得到。具有很高的抗炎功效，按照协同增效配比后，能明显的降低LPS刺激后，细胞中TNF‑α的表达，达到抗炎效果。

技术领域

本发明涉及具有抗炎功效的三重益生菌发酵复合物的制备方法和应用，属于微生物发酵技术领域。

背景技术

益生菌是活性微生物，摄入适量时，对人体微生物的平衡有积极影响。益生菌类益生菌是人类最常见且最易接触的活性微生物。这些活性益生菌，通过各种机理，例如通过螯合金属离子的能力来充当抗氧化剂，来调节宿主中活性氧(ROS)合酶、一氧化氮合酶(NOS)的活力，使得氧化酶系活力下调，从而提高机体的防御能力来抵抗氧化应激，降低炎症因子的表达，来达到抗炎的效果。

硝普纳(SNP)，又名亚硝基铁氰化钠，容易分解，是一种有效的含铁的可提供NO的药物。NO本身是一种自由基，不仅能够通过多种途径抑制蛋白质，还能与生物体内其他物质相互作用形成次级因子，造成必需蛋白质、脂质和DNA氧化损失。

NO是一种来自于一氧化氮合酶(NOS)的细胞内和细胞间部分子，被认为是众多免疫系统产生的最通用物质。有报道称，过量的NO产生会加深炎症反应或导致基因突变和神经损伤。抗炎作用可通过抑制NO的产生来证实。因此，筛选抑制NO生成菌是得到具有抗炎活性益生菌的基础。

目前，益生菌抗炎主要应用在食品中，保护人体肠道的安全；在人体皮肤上的应用报道较少，且单一的益生菌发酵物很难达到理想的抗炎效果。本研究采用采用独特的抗炎靶点筛选具有抗炎功效的活性益生菌，通过相互复配协同增效来解决单一益生菌抗炎效果差的弊端，增添了益生菌发酵物在抗炎类护肤品原料中的应用新局面。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是：单一的益生菌发酵物很难达到理想的抗炎效果。

[技术方案]

本发明采用独特的抗炎靶点筛选具有抗炎功效的活性益生菌，通过相互复配协同增效来解决单一益生菌抗炎效果差的弊端，增添了益生菌发酵物在抗炎类护肤品原料中的应用新局面。

本发明提供一种双歧杆菌Bicilia-B01(Bifidobacterium sp.Bicilia-B01)，于2021年4月27日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为：CCTCC NO:M 2021469。

所述双歧杆菌Bicilia-B01具有耐受NO的特性，在耐NO筛选培养基中于37℃条件下培养24h，OD₆₀₀可以达到2.4。

所述双歧杆菌的培养方法是，于厌氧手套箱中，挑取双歧杆菌Bicilia-B01单菌落接种至装有400mL无菌益生菌培养基的摇瓶中，摇瓶规格为500mL，放置在厌氧培养箱中，37℃培养24h。

本发明提供一种植物乳杆菌Bicilia-Lp01(Lactobacillus plantarum Bicilia-Lp01)，于2021年4月27日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学；保藏编号为：CCTCC NO:M 2021472。

所述植物乳杆菌Bicilia-Lp01具有耐受NO的特性，在耐NO筛选培养基中于37℃条件下培养24h，OD₆₀₀可以达到4.0。

所述植物乳杆菌的培养方法是于厌氧手套箱中，挑取植物乳杆菌单菌落接种至装有400mL无菌益生菌培养基的摇瓶中，摇瓶规格为500mL，放置在厌氧培养箱中，37℃培养24h。