[发明专利]双佐剂自载体原位纳米疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述双佐剂自载体原位纳米疫苗具有通过两亲性单体分子自组而成的球状结构，所述两亲性单体分子包含依次连接的疏水性佐剂分子、亲水性佐剂分子、微环境响应性连接分子和亲水性化疗药物分子，所述疏水性佐剂分子在所述球状结构的内侧，所述亲水性化疗药物分子在所述球状结构的外侧；

所述制备方法包括制备所述两亲性单体分子以及所述两亲性单体分子自组装成所述双佐剂自载体原位纳米疫苗的步骤；

制备所述两亲性单体分子的步骤包括：

将所述亲水性化疗药物分子连接在所述微环境响应性连接分子上，制备连接产物Ⅰ；

在所述连接产物Ⅰ上连接所述亲水性佐剂分子，制备连接产物Ⅱ；

将所述疏水性佐剂分子连接在所述连接产物Ⅱ上，制备所述两亲性单体分子；

所述疏水性佐剂分子为单磷脂酰A；所述亲水性佐剂分子为CpG ODN；所述微环境响应性连接分子为氨基酸序列为GPQGIAGQR的多肽分子；所述亲水性化疗药物分子为盐酸阿霉素。

2.根据权利要求1所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述亲水性佐剂分子和所述微环境响应性连接分子之间的连接键为酰胺键或者二硫键。

3.根据权利要求1所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，将所述亲水性化疗药物分子连接在所述微环境响应性连接分子上的步骤包括：

所述微环境响应性连接分子和活化剂a反应，制备活化产物a，

所述活化产物a和所述亲水性化疗药物分子反应，制备所述连接产物Ⅰ。

4.根据权利要求3所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，制备所述活化产物a的步骤中，所述活化剂a包含质量比为0.9-1.3:0.2-0.4的1,2-二氯乙烷和N-羟基丁二酰亚胺，反应的条件包括：温度为22℃-28℃，时长为1.5h-2.5h。

5.根据权利要求1或4所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，将所述疏水性佐剂分子连接在所述连接产物Ⅱ上的步骤包括：

所述疏水性佐剂分子和活化剂b反应，制备活化产物b；

所述活化产物b和所述连接产物Ⅱ反应，制备所述两亲性单体分子。

6.根据权利要求5所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，制备所述活化产物b的步骤中，所述活化剂b包含N,N'-羰基二咪唑；反应的条件包括：温度为22℃-28℃，时长为1.5h-2.5h。

7.根据权利要求1、4或6任一项所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，在所述连接产物Ⅰ上连接所述亲水性佐剂分子的步骤包括：

所述连接产物Ⅰ和交联剂反应，制备连接产物Ⅱ’；

所述连接产物Ⅱ’和经巯基修饰的所述亲水性佐剂分子反应，制备连接产物Ⅱ。

8.根据权利要求7所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述连接产物Ⅱ’的制备步骤中，所述交联剂包含琥珀酰亚胺3-(2-吡啶基二硫基)-丙酸酯，所述连接产物Ⅰ和所述琥珀酰亚胺3-(2-吡啶基二硫基)-丙酸酯的质量比为1:1-2；反应的条件包括：温度为22℃-28℃，时长为5h-7h；所述连接产物Ⅱ’和经巯基修饰的所述亲水性佐剂分子的质量比＞10。

9.根据权利要求1、4、6或8任一项所述的双佐剂自载体原位纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述双佐剂自载体原位纳米疫苗的粒径为200nm-300nm。