[发明专利]非人动物的眼房水的应用

说明书

本发明提供了非人动物的眼房水的应用。本发明所提供应用为非人动物的眼房水在制备哺乳动物卵母细胞体外成熟培养用的体外胚胎培养液中的应用，以及非人动物的眼房水在作为哺乳动物卵母细胞体外成熟培养用的体外胚胎培养液中的应用。实验证实，动物眼房水可以作为体外胚胎培养液的基础液，且眼房水和CR1aa培养液按体积比1:1混合培养所得的体外胚胎培养液培养后，牛体外受精胚胎囊胚质量相比于单独使用眼房水或CR1aa培养液培养的胚胎更好。

技术领域

本发明具体涉及非人动物的眼房水的应用。

背景技术

家畜胚胎的体外生产技术（IVP）是胚胎工程研究领域的一项关键技术，是研究发育生物学、动物生殖生理学的基础，同时体外胚胎生产技术对于促进家畜遗传进展、保存稀有物种和胚胎商业化生产提供了技术保障[1]。

目前在牛、羊的体外胚胎生产中，国内外学者己经开发出了多种体外发育培养液，如TCM199[2]，输卵管合成液（synthetic oviduct fluid，SOF）[3]，CR1［4］等。然而，当前无论从胚胎形态还是物质代谢方面，体外培养的胚胎在质量上都还达不到体内胚胎的水平[5]。例如在牛的体外胚胎培养中，目前最常使用的培养液为（CR1aa和SOF液），所培养的牛体外受精的囊胚发育率较低，而且胚胎质量也远不及体内胚胎，导致胚胎移植受体后的妊娠率低，因此如何提高囊胚发育率及胚胎质量成为体外受精胚胎生产的重点和研究的焦点。

通常情况下，大多数学者对于评价体外胚胎质量的优劣以及后期发育潜力，主要是通过在显微镜下观察胚胎在特定发育时期下的形态是否正常，发育过程是否符合培养日龄，胚胎卵裂率及囊胚发育率以及囊胚总细胞数等指标来评判。同时通过对体外生产的囊胚细胞进行滋养层细胞（TE）和内细胞团细胞（ICM）的差异染色方法，对不同培养体系下的囊胚细胞进行内细胞团细胞和滋养层细胞分染，统计各自细胞数和比例，直观判断囊胚的质量，也是一个有效的方法。并且此种方法近年来己在多种动物的胚胎质量鉴定中被广泛采用[6]。

发明内容

针对于背景技术中存在的问题与限制，本发明拟解决的技术问题是如何提高体外胚胎的生产效率。

本发明首先提供非人动物的眼房水在制备哺乳动物卵母细胞体外成熟培养用的体外胚胎培养液中的应用。

本发明还提供非人动物的眼房水在作为哺乳动物卵母细胞体外成熟培养用的体外胚胎培养液中的应用。

上述应用中，所述体外胚胎培养液为以眼房水和CR1aa培养液按体积比1：1混合而成。

上述应用中，所述CR1aa培养液的配制方法如下：将氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、丙酮酸钠、酚红、乳酸钙、牛血清白蛋白、BME、MEM、L-谷氨酰胺、青霉素和链霉素溶于水得到CR1aa培养液，使CR1aa培养液中氯化钠的浓度为114.7 mM、氯化钾的浓度为3.1 mM、碳酸氢钠的浓度为26.2 mM、丙酮酸钠的浓度为20.4 mM、酚红的浓度为1μL /mL、乳酸钙的浓度为5mM、牛血清白蛋白的浓度为3mg/mL、必需氨基酸（BME）的浓度为20μL/mL、非必需氨基酸（MEM）的浓度为10μL/mL、L-谷氨酰胺（L-Glutamin）的浓度为1 mmol/L、青霉素和链霉素的浓度均为1 %（具体青霉素的浓度为100U/mL，链霉素的浓度为100μg/mL）。

上述应用中，所述非人动物的眼房水来自家畜动物，包括且不限于牛、羊、猪等。

本发明还保护一种体外受精胚胎培养的方法，包括将非人动物的眼房水用于非人哺乳动物体外受精胚胎培养。

上述方法中，所述非人动物的眼房水作为哺乳动物卵母细胞体外成熟培养时体外胚胎培养液的组成成分。

上述方法中，所述体外胚胎培养液为前述的体外胚胎培养液。

上述体外胚胎培养液或上述体外受精胚胎培养的方法在动物人工辅助生殖中的应用也属于本发明的保护范围。