[发明专利]抗马立克氏病毒单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及检测试剂盒应用

说明书

本发明公开了一种抗马立克氏病毒单克隆抗体。本发明还公开了马立克氏病毒抗体检测试剂盒，以及上述单克隆抗体在制备诊断或治疗马立克氏病的产品中的应用。本发明利用抗马立克氏病毒的单克隆抗体制备的检测马立克氏病毒抗体的阻断ELISA试剂盒，特异性强、敏感性高，在马立克氏病毒的流行病学调查、疫苗免疫效力评估和马立克氏病的诊断方面具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及兽用诊断生物制品技术领域，尤其涉及一种抗马立克氏病毒单克隆抗体、其 杂交瘤细胞株、以及包含该单克隆抗体的马立克氏病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒。

背景技术

马立克氏病(Marek’disease，MD)是由马立克氏病毒(Marek’s disease virus，MDV)引 起的鸡的一种恶性淋巴组织增生性肿瘤病。能够引起感染鸡的内脏和皮肤出现肿瘤，同时侵 袭感染鸡的中枢神经系统，导致感染鸡出现瘫痪或死亡的现象。在接种HVT(马立克氏病火 鸡疱疹病毒疫苗)或者CVI-988疫苗(鸡马立克氏病活疫苗)后，MDV在鸡群中诱发肿瘤的 这种病例屡见不鲜，给国内养禽业造成了巨大的经济损失。急需开发特异性诊断马立克氏病 和有效监测MDV免疫抗体的试剂盒。

马立克氏病毒(Marek’s disease virus，MDV)是属于疱疹病毒科，α-疱疹病毒亚科，马 立克病毒属。MDV病毒粒子呈典型的疱疹病毒形态。病毒粒子有两种存在形式：一种是完整 的带有囊膜的病毒粒子，直径约为273-400nm，主要存在于鸡羽毛囊上皮细胞中，其抵抗力较 强；另一种是没有囊膜的病毒粒子，其直径约为85-100nm，是严格的细胞结合性病毒，其抵 抗力较弱。MDV的主要传染源是病鸡和带毒鸡，感染鸡的羽毛囊上皮细胞内如果存在病毒， 即可通过水平传播的方式进行传播。雏鸡最容易感染MDV，从病毒感染到发病有较长的潜伏 期。感染MDV病鸡的临床症状主要包括体重下降、间歇性肢体麻痹、精神沉郁等。近些年来， MDV毒力的不断增强，部分病鸡3-4周龄就出现肿瘤，8-9周龄时肿瘤已经很严重。

虽然根据该病的临床症状与剖检病变可以做出初步诊断，但仍应结合实验室检测以确诊 该病。目前鉴定马立克氏病毒通常采用的免疫学方法有免疫荧光技术(FA)、酶联免疫吸附 试验(ELISA)、病毒中和试验(VN)。针对鸡羽毛囊的MDV还可以采用琼脂扩散试验(AGP) 进行鉴定。分子诊断马立克氏病毒的方法是针对特异性致病基因的诊断，包括聚合酶链式反 应(PCR)、荧光定量PCR等。但是，这些鉴定诊断方法的敏感性都不高，需要研制更高敏感 性的马立克氏病毒抗体检测试剂盒。

发明内容

本发明要解决目前市场上缺乏高敏感性的马立克氏病毒抗体检测产品的技术问题，提供 一种抗马立克氏病毒单克隆抗体，该单克隆抗体可用于快速、灵敏地检测马立克氏病毒，对 马立克氏病毒的临床诊断及其疫苗免疫效力评估提供很好的方法和试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种抗马立克氏病毒单克隆抗体。

优选的，所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO：C2021104的杂交瘤细胞株产生。

所述单克隆抗体的抗体亚类为为IgG2a，其轻链为к链。

在本发明的另一方面，还提供了一种分泌产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

优选的，该杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC NO：C2021104。

在本发明的另一方面，还提供了一种马立克氏病毒抗体检测试剂盒，包含上述的单克隆 抗体。

优选的，本发明试剂盒还包含马立克氏病毒抗原包被的ELISA酶标板、阳性对照血清、 阴性对照血清、样品稀释液、10倍浓缩洗涤液、马立克氏病毒单克隆抗体、酶标二抗、显色 液、终止液、封板膜和试剂盒说明书。其中酶标二抗为羊抗鼠酶标二抗。