[发明专利]一种猪胚胎培养液及应用

说明书

本发明提供了一种猪胚胎培养液。所述培养液为包含以下浓度组分的PZM‑3培养液：还原型谷胱甘肽1～8g/L、茶多酚10～50mg/L、猪卵泡液8～15v/v％。上述培养液是在现有PZM‑3培养液中加入了合适浓度的还原型谷胱甘肽、茶多酚和猪卵泡液。还原型谷胱甘肽和茶多酚组合能复配增效，使得培养液促进猪胚胎发育的效果优于单独使用还原型谷胱甘肽或茶多酚。而猪卵泡液的使用进一步提升了培养液的功效。本发明提供的培养液能有效促进猪体外培养胚胎的发育，提高猪体外培养胚胎的4细胞卵裂率和囊胚率，以及囊胚的总细胞数目，在猪胚胎体外生产中具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于猪养殖技术领域，具体涉及一种猪胚胎培养液及应用。

背景技术

近年来，体外生产胚胎被广泛的应用于生产具有经济价值的动物，同时，体外受精技术(IVF)、单精子注射技术(ICSI)、胚胎移植技术、胚胎分割技术及胚胎干细胞工程等的应用极大的促进了畜牧业的发展。随着现代繁殖生物技术的发展及胚胎体外生产技术的逐步完善，利用体外受精技术生产体外胚胎呈现出潜在的广阔应用前景。家畜胚胎体外生产是快速扩大优秀种群数量的有效途径。虽然通过体外受精技术已经获得了活的后代，但体外受精后的早期胚胎体外发育率较低，这严重限制了胚胎体外生产的推广应用。

猪，杂食类哺乳动物，身体肥壮，四肢短小，鼻子口吻较长，体肥肢短，性温驯，适应力强，繁殖快。随着社会经济及畜牧业等领域的飞速发展，迫切需要体外制备更多更优质的动物胚胎，然而，在现实生产过程中，体外发育的胚胎阻滞在某一阶段尤为严重，浪费了大量资源，而猪的胚胎在体外发育过程中阻滞在4细胞阶段严重。

目前用于猪的胚胎体外培养液包括改良的Whitten培养液、NCSU23/NCSU37、Beltsville embryo culture medium(BECM)培养液和PZM系列(PZM-3/PZM-4/PZM-5)培养液等。它们基本能满足其发育至囊胚的代谢和营养需要，然而这些经体外培养后的胚胎经胚胎移植后，其妊娠率和窝均产仔数均很低，发育至囊胚的细胞数也显著低于体内胚胎，因此仍需要开发能促进猪胚胎体外发育的培养基，以提高猪早期胚胎体外生产效率。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种猪胚胎培养液，其能有效促进猪体外培养胚胎的发育，提高猪体外培养胚胎的4细胞卵裂率和囊胚率，以及囊胚的总细胞数目。

具体技术方案为：

一种猪胚胎培养液，所述培养液为包含以下浓度组分的PZM-3培养液：还原型谷胱甘肽1～8g/L、茶多酚10～50mg/L、猪卵泡液8～15v/v％。

在其中一些实施例中，所述培养液为包含以下浓度组分的PZM-3培养液：还原型谷胱甘肽1.5～5g/L、茶多酚20～30mg/L、猪卵泡液10～15v/v％。

在其中一些实施例中，所述培养液为包含以下浓度组分的PZM-3培养液：还原型谷胱甘肽2g/L、茶多酚30mg/L、猪卵泡液12v/v％。

在其中一些实施例中，所述培养液中还原型谷胱甘肽与茶多酚的质量比为200：(2～3)。

在其中一些实施例中，所述培养液中还原型谷胱甘肽与茶多酚的质量比为200：3。

本发明还提供了所述猪胚胎培养液的制备方法，包括以下步骤：按使用量将还原型谷胱甘肽、茶多酚、猪卵泡液加入PZM-3培养液中，过滤除菌，即得；

本发明还提供了所述的猪胚胎培养液在猪胚胎体外培养中的应用。

本发明还提供了一种猪胚胎体外培养方法，包括以下步骤：将体外授精形成的猪胚胎或猪克隆胚胎置于上述猪胚胎培养液中，于38.5℃，5％CO₂，100％湿度条件下进行培养。