[发明专利]用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的引物及探针组合物及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的引物及探针组合物，其特征在于，所述引物的上游引物的核苷酸序列均如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列均如SEQ ID NO.2所示；

探针包括第一探针和第二探针；

第一探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；第二探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

第一探针和第二探针的3'端均结合荧光淬灭基团；第一探针和第二探针的5'端分别结合第一荧光报告基团、第二荧光报告基团和第三荧光报告基团；

第一荧光报告基团、第二荧光报告基团和第三荧光报告基团均与荧光淬灭基团相互作用生成本身不发光的的配位化合物。

2.根据权利要求1所述的引物及探针组合物，其特征在于，所述荧光淬灭基团为MGB。

3.根据权利要求1或2所述的引物及探针组合物，其特征在于，所述第一荧光报告基团为FAM。

4.根据权利要求3所述的引物及探针组合物，其特征在于，所述第二荧光报告基团为VIC。

5.根据权利要求4所述的引物及探针组合物，其特征在于，所述第三荧光报告基团为NED。

6.一种用于检测软骨发育不全相关FGFR3基因变异位点的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求1-5任一项所述的引物及探针组合物。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括第一PCR反应体系和第二PCR反应体系。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，第一PCR反应体系为20μL，包括10μM、1.8μL的上游引物和下游引物，10μM、0.4μL的野生探针，10μM、0.6μL的第一探针，qPCR反应缓冲液10μL，待测DNA溶液2μL和加入体系前的浓度为1-15ng/μL，ddH₂O的体积为3.4μL。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，第二PCR反应体系为20μL，包括10μM、1.8μL的上游引物和下游引物，10μM、0.2μL的野生探针，10μM、0.6μL的第二探针，qPCR反应缓冲液10μL，待测DNA溶液2μL和加入体系前的浓度为1-15ng/μL，ddH₂O的体积为3.4μL。