[发明专利]一种测定猪大肠内容物短链脂肪酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定猪大肠内容物短链脂肪酸含量的方法，包括以下步骤：1）、采样：结扎猪大肠中段，并于‑10℃～‑20℃下保存，使得猪大肠内容物气态SCFA变成冰晶状；2）、样品前处理：取猪大肠内容物与冰水振荡混匀，再过滤杂质，离心，取上清液，加入偏巴酸，振荡混匀，低温保存固定SCFA；取出解冻后离心，取上清液待测；3）、短链脂肪酸含量测定：通过Agilent7890B气相色谱和AgilentDB‑1701P色谱柱进行气相色谱分析。本发明将大肠结扎，并于‑10℃～‑20℃下保存，使得气态SCFA变成冰晶状，在操作过程中处于低温操作，使得SCFA的浓度更准确，进而在Agilent7890B上能够测定猪大肠内容物SCFA的真实含量。

技术领域

本发明涉及一种测定猪大肠内容物短链脂肪酸含量的方法，属于肠道脂肪酸含量测定技术领域。

背景技术

猪大肠微生物分解代谢产生短链脂肪酸(SCFA)，分别是乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸，其与生理调控、营养吸收、神经免疫等功能息息相关；测定其产量能提升科学研究的准确性。

公开号为CN105021726A的专利文献公开了一种快速测定肠道或粪便中短链脂肪酸含量的方法，该方案使用安捷伦Agilent6890N气相色谱和HP-INNOWAX色谱柱，然而使用其方法在Agilent7890B上实际测试效果不佳，杂峰较多。此外，猪大肠内容物SCFA浓度较高，其稀释比例较低，样品进样量0.2μl～0.5μl，使得SCFA气化速度较快，出峰时间相近，实际测试样品后不能在Agilent7890B上展示出峰时间。

综上可知，目前未有Agilent7890B气相色谱仪测定猪大肠短链脂肪酸相关文献，仅参考以往机型操作方法使用，但使用效果出峰时间拥挤，难以在测定实际样品时准确判断样品SCFA某酸含量。此外，以往方法是对肠道及粪便进行测定，由于猪大肠SCFA的易挥发，含有气态SCFA等，以往方法未能将肠道内气态SCFA含量进行测定，故数据存在偏差。

发明内容

基于上述，本发明提供一种测定猪大肠内容物短链脂肪酸含量的方法，以解决现有技术不能准确测量猪大肠内容物短链脂肪酸含量的技术问题。

本发明的技术方案是：一种测定猪大肠内容物短链脂肪酸含量的方法，包括以下步骤：

1)、采样：结扎猪大肠中段，并于-10℃～-20℃下保存，使得猪大肠内容物气态SCFA变成冰晶状；

2)、样品前处理：取猪大肠内容物与冰水振荡混匀，再过滤杂质，离心，取上清液，加入偏巴酸，振荡混匀，低温保存固定SCFA；取出解冻后离心，取上清液待测；

3)、短链脂肪酸含量测定：通过Agilent7890B气相色谱和AgilentDB-1701P色谱柱进行气相色谱分析。

可选的，在采样步骤中，将猪大肠分为盲肠、结肠、直肠三段肠段，分别结扎其中段，进而可以测量猪大肠不同部位的短链脂肪酸含量。可选的，在样品前处理步骤中，猪大肠内容物与冰水按1:1振荡混匀。

可选的，在样品前处理步骤中，低温保存的温度为-20℃，时间为12h。

可选的，所述气相分析的条件为：H₂气压值0.25KPa，N₂气压值0.25KPa，干空气压值0.5KPa，检测程序如下：FID检测器，色谱柱为AgilentDB-1701P 30×0.32×0.25；进样口设置为220℃，分流比40：1，柱温箱50℃，以3℃升温至70℃，保持1min，再以8℃升温至180℃，检测器温度为250℃，载气为氮气，流速为2.0mL/min，H₂流量为40mL/min，助燃气为空气，流量450mL/min，柱流量±尾吹气流量45mL/min，火焰器设置为点火，GC自动进样，进样量1μL，抽取样品前色谱级甲醇洗针5次，抽样后洗针3次。