[发明专利]一种基于CRISPR/CasRx RNA编辑系统靶向炎症因子的细胞微囊泡

权利要求书

1.一种基于CRISPR/CasRx RNA编辑系统靶向炎症因子的细胞微囊泡，其由转染了目的质粒的工程细胞所表达而获得，所述细胞微囊泡内包含由外泌信号肽引导的CRISPR/CasRx编辑酶和靶向炎症因子的sgRNA。

2.根据权利要求1所述基于CRISPR/CasRx RNA编辑系统靶向炎症因子的细胞微囊泡，其特征在于，所述目的质粒中包括CRIPPR/CasRx序列及其启动子、外泌信号肽、Tag序列、终止信号序列、靶向炎症因子的sgRNA序列及其启动子。

3.根据权利要求1所述基于CRISPR/CasRx RNA编辑系统靶向炎症因子的细胞微囊泡，其特征在于，其特征在于，所述目的质粒中CRISPR/CasRx序列的启动子为CAG启动子；所述外泌信号肽选自tPA、Human IgG2、Human Insulin、ARRDC1、ARRDC1+2xWW domain、HumanOSM、Mouse Ig Kappa或BM40；所述Tag序列为HA-tag序列；所述终止信号为polyA终止信号序列；所述sgRNA序列的启动子为U6启动子序列；所述炎症因子为IL-6、TNFa、IL-18、IL-1b和IFNr。

4.根据权利要求3所述基于CRISPR/CasRx RNA编辑系统靶向炎症因子的细胞微囊泡，其特征在于，所述sgRNA序列的具体核苷酸序列如下：

IL-6sgRNA：acaggtctgttgggagtggtatcctctgtg；

TNFa sgRNA：tttgctacgacgtgggctacaggcttgtc；

IL-18sgRNA：ttcacagagagggtcacagccagtcctctt；

IL-1b sgRNA：aacgtcacacaccagcaggttatcatcatc；

IFNr sgRNA：actgtgccgtggcagtaacagccagaaac。

5.根据权利要求1所述基于CRISPR/CasRx RNA编辑系统靶向炎症因子的细胞微囊泡，其特征在于，所述工程细胞由普通细胞系或干细胞转染目的质粒得到。

6.一种用于制备工程细胞的目的质粒，其包括CRIPPR/CasRx序列及其启动子、外泌信号肽、Tag序列、终止信号序列、靶向炎症因子的sgRNA序列及其启动子。

7.根据权利要求6所述用于制备工程细胞的目的质粒，其特征在于，所述炎症因子为IL-6、TNFa、IL-18、IL-1b和IFNr；所述sgRNA序列的具体核苷酸序列如下：

IL-6sgRNA：acaggtctgttgggagtggtatcctctgtg；

TNFa sgRNA：tttgctacgacgtgggctacaggcttgtc；

IL-18sgRNA：ttcacagagagggtcacagccagtcctctt；

IL-1b sgRNA：aacgtcacacaccagcaggttatcatcatc；

IFNr sgRNA：actgtgccgtggcagtaacagccagaaac。

8.一种靶向炎症因子的sgRNA序列的筛选方法，包括以下步骤：

1)将目的炎症因子的cDNA序列从小鼠或人的cDNA文库中拷贝下来，连接进VS005载体或DP375载体质粒，炎症因子片段后面依次接2A序列和报告基因，获得的质粒命名为1号质粒；

2)构建携带CRISPR/CasRx序列、待筛选的sgRNA序列以及与1号质粒中报告基因不同波段的荧光报告基因的质粒，命名为2号质粒；

3)将所述1号质粒和2号质粒共同转染至自身不表达所述目的炎症因子的哺乳动物细胞，转染后使该哺乳动物细胞先过表达1号质粒上相应的炎症因子，之后被2号质粒上的CRISPR/CasRx和待筛选的sgRNA敲低，最终通过1号质粒的荧光强度判断相应sgRNA的效率，筛选出合适的sgRNA序列。