[发明专利]单个球虫卵囊的分离方法和应用

权利要求书

1.一种单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

标记：取透明的容器，在容器的底部做若干个固定的标记，并区分各个标记的位置，所述若干个标记之间相互分离；

制备平板：将灭菌的凝胶液倒入做好标记的容器中，待凝胶液凝固，得到凝胶平板；制备空白凝胶平板备用；

滴加：将孢子化的球虫卵囊用水稀释制成卵囊液，混合均匀后吸取卵囊液滴加至凝胶平板上，每次滴加的位置对应一个标记；

记录：在显微镜下观察凝胶平板表面滴液中是否含有单个球虫卵囊，记录单个球虫卵囊滴液所在位置对应的容器上的标记；

分离：用吸管在空白凝胶平板上挖取空白凝胶作为封顶凝胶，用该吸管继续在已确定有单个球虫卵囊的凝胶平板上挖取表面具有单个球虫卵囊的凝胶作为垫底凝胶，将单个球虫卵囊固定于封顶凝胶和垫底凝胶之间，即分离出单个球虫卵囊。

2.根据权利要求1所述的单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述标记步骤中，透明的容器为玻璃培养皿，每个标记的形状和大小相同，相邻两个标记之间的间隔为3-5mm。

3.根据权利要求1所述的单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述制备平板步骤中，所述凝胶液为琼脂糖凝胶液，所述琼脂糖凝胶液中琼脂糖的浓度为0.01-0.02g/mL。

4.根据权利要求1所述的单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述制备平板步骤中，凝胶的厚度为2-3mm。

5.根据权利要求1所述的单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述滴加步骤中，所述卵囊液的浓度为200-1000个/mL，吸取的卵囊液的体积为1.5-2.5μL。

6.根据权利要求1所述的球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述滴加步骤中，所述球虫卵囊为柔嫩艾美尔球虫卵囊。

7.根据权利要求1所述的球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述分离步骤中，吸管的直径为5-7mm。

8.根据权利要求1-7任一项所述的单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，所述分离步骤后还包括后处理：用工具将吸管内的凝胶推至吸管内部，并将吸管两端封口。

9.根据权利要求8所述的单个球虫卵囊的分离方法，其特征在于，吸管两端的封口与凝胶的距离为4-5cm；所述工具为消毒的解剖针，吸管为塑料吸管，封口采用热封。

10.一种球虫卵囊的接种方法，其特征在于，取采用权利要求1-9任一项所述的分离方法得到的单个球虫卵囊，连带凝胶一同推入待接种的动物口中，喂水使其吞下。