[发明专利]一种双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法及其检测Pb2+

权利要求书

1.一种双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

(1)首先将6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶、氢氧化钠加入纯化水A中混合均匀，得到混合液A；然后将氯金酸加入纯化水B中混合均匀，得到混合液B；将混合液A加入混合液B中得到混合溶液C，在一定温度条件下避光反应后，将得到的产物装入透析袋中进行透析，透析后的产物再经冷冻干燥处理得到粉末，即为AuNCs；

(2)将玻碳电极依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，打磨后依次在水、乙醇和水中超声后在室温下干燥，干燥后得到预处理的玻碳电极；

(3)将步骤(1)制备得到的粉末状AuNCs溶于纯化水中，得到AuNCs溶液；然后将AuNCs溶液修饰到步骤(2)预处理的玻碳电极表面，并在室温下干燥，干燥后的产品标记为AuNCs/GCE；

(4)取巯基功能化的互补DNA，记为cDNA；将cDNA修饰在步骤(3)制备的电极AuNCs/GCE表面，在一定温度下孵育，孵育后的产品标记为cDNA/AuNCs/GCE；

(5)在室温条件下，取6-巯基己醇溶液修饰在步骤(4)制备的自组装电极cDNA/AuNCs/GCE表面，室温条件下孵育后得到MCH/cDNA/AuNCs/GCE；

(6)取Pb²⁺适配体，记为Apt；在一定温度下将Apt修饰在步骤(5)制备的电极MCH/cDNA/AuNCs/GCE表面，通过与cDNA互补固定在传感界面，在一定温度条件下反应后的产品标记为Apt/MCH/cDNA/AuNCs/GCE；

(7)将罗丹明B溶液修饰在步骤(6)制备的电极Apt/MCH/cDNA/AuNCs/GCE表面，并在室温下孵育一段时间，形成自组装传感器，产品标记为RhB/Apt/MCH/cDNA/AuNCs/GCE。

2.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述混合溶液C中氯金酸、6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶、氢氧化钠、纯化水A和纯化水B用量比例为0.15g：0.17g：0.12g：15mL：15mL；所述一定温度条件为25℃，避光反应的时间为1h；所述透析的时间为24h。

3.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述玻碳电极的直径d＝3mm；所用的三氧化二铝粉末的粒径依次为0.3μm和0.05μm。

4.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，AuNCs溶液的浓度为1mg/mL，用量为8μL。

5.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述cDNA的浓度为2μM，用量为6μL；所述孵育时间为12h，孵育温度为4℃。

6.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述6-巯基己醇溶液的浓度为2μM，修饰用量为6μL；所述孵育的时间为40min。

7.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述Apt的浓度为2μM，修饰用量为6μL；所述孵育的时间为40min，一定温度为37℃。

8.根据权利要求1所述的双信号放大电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述罗丹明B溶液的浓度为2mM，用量为6μL；所述孵育一段时间为40min。