[发明专利]一种鉴定胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育的引物对及其应用

说明书

本发明公开了一种鉴定胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育的引物对及其应用，所述引物对根据转录组分析筛选的Indel分子标记设计得到，所述应用为采用所述引物对鉴定胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育。本申请通过对一组稳定的胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育系及其保持系的总RNA进行转录组测序分析，与已公布的胡萝卜参考线粒体基因组进行比对，筛选出在不育系与保持系之间有差异的Indel位点并设计得到引物。通过在不同品种的胡萝卜可育株与不育株间进行特异性扩增验证，结果显示本申请的引物对能够完全区分待测品种育性，能在苗期快速筛选出细胞质雄性不育的胡萝卜品种，准确率高，为选育过程中去除杂株，具有重要的实际应用价值和市场前景。

技术领域

本发明属于生物技术育种领域，具体涉及一种鉴定胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育的引物对及其应用。

背景技术

胡萝卜(Daucus carota L.)属于伞形科胡萝卜属的一类重要的根类蔬菜，其肉质根中富含丰富的类胡萝卜素，具有很高的营养价值，广泛种植于世界各地，是全球性十大蔬菜作物之一。胡萝卜种植面积的迅速增加，不仅对种子的需求量大大增加，而且对种子的质量以及生产效率要求更高。

胡萝卜是二年生高度异花授粉作物，花器官又极小，人工去雄困难，难以开展常规人工杂交育种。由于开展常规的人工杂交育种有一定难度，导致胡萝卜的杂种优势利用比较落后。因此，早期育种方法主要采用群体选择和系谱选择法，但这种方法育成的品种一致性和稳定性都比较差，主要原因在于常规品种本身的杂合性和群体内自交造成严重的种性衰退。

随着胡萝卜细胞质雄性不育材料的发现，使得胡萝卜一代杂种的选育成为现实。目前胡萝卜细胞质雄性不育类型主要有瓣化型和褐药型两种类型。随着胡萝卜雄性不育遗传机制的深入研究，胡萝卜雄性不育材料广泛应用于实际育种工作中，从而可以保证品种具有较高的一致性和稳定性。20世纪60年代，美国率先投放了第一个胡萝卜一代杂种。目前，欧美国家生产使用的胡萝卜品种多为一代杂种，但不同国家或种子公司使用的雄性不育源不同，如美国主要以瓣化型为主，欧洲多数种子公司使用的是褐药型，亚洲多使用瓣化型。

传统常规培育胡萝卜雄性不育系的方法是运用回交转育方法，利用优良可育单株回交，对回交后代进行育性鉴别，重在考查有保持系无恢复基因，育性鉴别方法需在植株开花期，然而由于胡萝卜雄性不育遗传背景复杂，在育种中经常出现几代后，预选的不育系内还出现可育植株。

因此，开发胞质基因分子标记对回交材料进行育性鉴定研究，可以在苗期区分胡萝卜育性，提前去除可能掺杂的可育株，可大大节省人力物力及繁种空间，为后续开花后回交提供便利。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种利用Indel分子标记设计得到的引物对以及采用所述引物对鉴定胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育植株的方法和应用，本申请提供的引物对和方法具有简单易行、特异性强、稳定度高的优点。

本发明的技术内容如下：

第一方面，本发明提供一种鉴定胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育性的引物对，

所述引物对的正向引物序列为SEQ ID NO.1：

5’-TTGTGCGGTTAAGGTTGTTGT-3’；

所述引物对的反向引物序列为SEQ ID NO.2：

5’-CCTGTTCTTGTGGATCAATGGA-3’。

所述引物对由扩增特异性DNA片段的上下游两条引物组成，即正向引物和反向引物；所述特异性DNA片段中具有能够被正向引物和反向引物组成的引物对扩增的且同时位于胡萝卜参考线粒体基因组中的靶序列，所述参考线粒体基因组的网址如下：

http://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-51/fasta/daucus_carota/dna/。